基于流式细胞术评估人精子功能的初步研究

摘要

目的:通过对比流式细胞仪和荧光显微镜两种检测荧光染色的方法，探讨流式细胞仪检测人精子质膜完整、DNA碎片指数、线粒体活性和顶体完整的可行性，并探讨流式细胞仪PI/RH123联合染色法检测精子质膜完整和线粒体活性的可行性。
　　方法:选择2015年9月-11月在广西医科大学第三附属医院生殖医疗中心门诊就诊的不孕夫妇，男方精液常规分析结果在WHO第5版正常范围内的精液标本共120份，按染色方法随机分成A、B两组，A组:单染组(60份)，使用碘化丙啶(PI)染色检测精子质膜完整、吖啶橙(AO)染色检测DNA碎片指数、罗丹明123(RH123)染色检测线粒体活性和异硫氰酸荧光素标记的花生凝集素(FITC-PNA)染色检测顶体完整。染色后将标本随机分为A1组和A2组各30份，分别使用流式细胞仪(FCM)和荧光显微镜(MIC)检测，比较两组检测结果，评估流式细胞仪单染的可行性;B组:PI/RH123双染组，使用PI单染检测精子的质膜完整、RH123单染检测线粒体活性作为对照，使用PI/PH123联合双染检测精子质膜完整与线粒体活性。染色后将标本随机分为B1组和B2组各30份，分别使用流式细胞仪(FCM)和荧光显微镜(MIC)检测，比较两组检测结果，评估流式细胞仪PI/RH123双染的可行性。
　　结果:1.A1组FCM单染和A2组MIC单染的结果比较:A1组和A2组检测精子质膜完整率分别为76.2±9.70％、73.88±8.40％，DNA碎片指数(DFI)分别为9.89±10.37％和10.02±7.56％，线粒体活性分别为66.67±19.88％、69.20±9.04％，顶体完整率为80.88±23.56％、83.69±6.70％，A1组和A2组结果比较，差异均无统计学意义(P＞0.05);
　　2.B组PI/RH123双染组的单染和双染结果比较:PI、PI/RH123检测质膜完整的结果比较，B1组分别为70.08±10.25、69.86±9.80，B2组分别为68.74±9.18、67.84±12.02，差异均无统计学意义(P＞0.05);RH123、PI/RH123检测线粒体活性的结果比较，B1组分别为55.69±12.82、49.39±13.13，B2组分别为57.14±10.47、55.04±9.25，差异均无统计学意义(P＞0.05);
　　3.B1组FCM双染和B2组MIC双染的结果比较:PI/RH123染色结果PI-/RH123+、PI-/RH123-、PI+/RH123-，B1组分别为49.39±13.13、20.47±10.47、24.67±15.00，B2组分别为49.15±9.62、18.69±13.27、26.27±12.74，差异均无统计学意义(P＞0.05);
　　4.精子质膜完整与精子总活力、前向运动均呈正相关性，DFI与前向运动呈负相关性，线粒体活性与前向运动呈正相关性，p均＜0.05;5.精子质膜完整与线粒体活性正相关(p＜0.05)，与DFI、顶体完整无明显相关性(P＞0.05); DFI与线粒体活性负相关(p＜0.05)，与顶体完整无明显相关性(P＞0.05)。
　　结论:1.流式细胞仪单种染色检测精子质膜完整、DNA碎片指数、线粒体活性、顶体完整具有可行性，检测效率高;
　　2.利用流式细胞仪PI/RH123联合染色同时检测精子质膜完整与线粒体活性具有可行性，检测效率高。

目录

声明

个人简历

摘要

前言

资料与方法

1．研究对象与研究设计

2．主要仪器，试剂及试剂的配制

3．研究方法

4．统计学分析

结果

一、流式细胞仪单染组(A1组)和荧光显微镜单染组(A2组)的比较

二、流式细胞仪双染组(B1组)和荧光显微镜双染组(B2组)的比较

三、精子总活力、前向运动与质膜完整、DFI、线粒体活性、顶体完整的相关性分析

四、质膜完整、DFI、线粒体活性和顶体完整相关性比较

五、实验图片

讨论

结论

参考文献

综述 流式细胞术在精子质量评估中的应用

附录

致谢