RhoGDI2基因及人脐静脉内皮细胞对T24膀胱癌细胞侵袭、迁移及增殖的影响

摘要

目的：膀胱癌是我国泌尿系肿瘤当中最常见的恶性肿瘤，易浸润、转移是膀胱癌最主要的特征。RhoGTP酶GDP解离抑制因子2(rho GDP dissociation inhibitor2，RhoGDI2)是近年来发现的抑制肿瘤迁移的基因之一，其在高迁移潜能的膀胱癌细胞中的表达量显著低于低迁移潜能细胞。内皮细胞一般对肿瘤均是促进作用，如果将RhoGDI2基因和人脐静脉内皮细胞放在一起，到底是促进大于抑制呢，还是抑制大于促进呢？本实验便是观察在人脐静脉内皮细胞共培养的Transwell模型下，RhoGDI2基因对人膀胱癌T24细胞的侵袭、迁移及增殖的影响。
　　方法：设计并合成含有RhoGDI2基因过表达的GFP慢病毒载体，利用western blotting技术检测RhoGDI2基因在 LV-RhoGDI2-GFP/T24、LV-CONTROL-GFP/T24、T24三组蛋白水平表达之间的差异。利用Transwell模型和Matrigel基质胶检测三组细胞的侵袭能力的差异，利用Transwell模型检测三组细胞的迁移能力的差异，利用Transwell模型和CCK-8试剂检测三组细胞的增殖能力的差异。
　　结果：本研究成功构建了RhoGDI2基因的慢病毒载体，western blotting技术检测到LV-RhoGDI2-GFP/T24的RhoGDI2的蛋白表达量明显高于LV-CONTROL-GFP/T24和T24组（P＜0.05）；在Transwell侵袭实验当中，无论是非共培养组还是共培养组，LV-RhoGDI2-GFP/T24组的侵袭的细胞数目明显少于LV-CONTROL-GFP/T24组及T24组（P＜0.05）。而各自细胞系自身的非共培养组和共培养组的比较当中，LV-RhoGDI2-GFP/T24非共培养组侵袭的细胞数和LV-RhoGDI2-GFP/T24共培养组侵袭的细胞数目无差异（P＞0.05），但是LV-CONTROL-GFP/T24非共培养组和T24非共培养组的侵袭的细胞数明显少于LV-CONTROL-GFP/T24共培养组和T24共培养组（P＜0.05）。在Transwell迁移实验当中，无论是非共培养组还是共培养组，LV-RhoGDI2-GFP/T24组的侵袭的细胞数目明显少于LV-CONTROL-GFP/T24组及T24组（P＜0.05）。而各自细胞系自身的非共培养组和共培养组的比较当中，LV-RhoGDI2-GFP/T24非共培养组侵袭的细胞数和LV-RhoGDI2-GFP/T24共培养组侵袭的细胞数目无差异（P＞0.05），但是LV-CONTROL-GFP/T24非共培养组和T24非共培养组的侵袭的细胞数明显少于LV-CONTROL-GFP/T24共培养组和T24共培养组（P＜0.05）。在增殖能力实验当中，无论是非共培养组还是共培养组，在第二天开始，LV-RhoGDI2-GFP/T24组的OD值明显小于LV-CONTROL-GFP/T24组及T24组（P＜0.05）。而各自细胞系自身的非共培养组和共培养组的比较当中，在第三天开始，LV-RhoGDI2-GFP/T24非共培养组OD值和LV-RhoGDI2-GFP/T24共培养组的OD值无差异（P＞0.05），但是LV-CONTROL-GFP/T24非共培养组和T24非共培养组的OD值明显小于LV-CONTROL-GFP/T24共培养组和T24共培养组（P＜0.05）。
　　结论：RhoGDI2基因对T24膀胱癌的侵袭、迁移及增殖能力均有抑制作用；人脐静脉内皮细胞对T24膀胱癌细胞的侵袭、迁移及增殖能力均有促进作用；RhoGDI2基因可以“阻断”人脐静脉内皮细胞对T24膀胱癌的侵袭、迁移及增殖能力的促进作用。

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前言

参考文献

慢病毒介导的RhoGDI2基因过表达人膀胱癌T24细胞的构建与验证

1.1材料与方法：

1.2慢病毒的构建、包装及转染

1.3 Western blotting检测慢病毒转染后T24膀胱癌细胞中的RhoGDI2的表达

1.4. 实验结果：

共培养模型下的RhoGDI2基因对人膀胱癌T24细胞侵袭、迁移及增殖能力的影响

1.1材料与方法：

1.2 RhoGDI2基因对T24膀胱癌细胞侵袭能力的影响

1.3 RhoGDI2基因对T24膀胱癌细胞迁移能力的影响

1.4 RhoGDI2基因对T24膀胱癌细胞增殖能力的影响

1.5 RhoGDI2基因对T24膀胱癌细胞侵袭、迁移、增殖能力的影响实验结果

讨论

参考文献

综述: Transwell 共培养技术及其应用的研究进展

致谢