益元康方中西洋参总皂苷、总多糖提取纯化工艺研究

摘要

目的：近几年国内对西洋参做了大量研究，证明西洋参具有广泛的生物学活性，主要有效成分为西洋参总皂苷、多糖等化合物，可作用于多种免疫活性细胞，促进某些细胞因子的分泌来进一步发挥免疫调节作用。本课题将益元康方中具有生物活性的西洋参总皂苷、总多糖等成分进行提取纯化，为益元康方进一步筛选有效组分以及免疫调节作用的研究打下基础。
　　方法：在药材质量控制中，加80％乙醇50ml，加热回流提取3次，每次1h提取西洋参中总皂苷，以香草醛冰乙酸为显色剂，采用紫外可见分光光度法测定总皂苷含量。加水50ml，水浴加热回流提取3次，每次1h，滤过，合并滤液，浓缩至50ml，精密量取10ml，加入乙醇30ml，摇匀，4℃静置24h，取出，离心（4000r?min-1,10min），倾去上清液，沉淀加水溶解，加入等体积的Sevag试剂（正丁醇：氯仿=1:4）除蛋白2次，得到总多糖供试品，采用蒽酮硫酸法显色法测定总多糖含量。通过对12批西洋参药材进行指纹图谱构建，对比对照品的保留时间，对7个特征峰进行化学指认，运用指纹图谱参数共有峰和相似度进行分析，并对图谱进行聚类分析。在优选西洋参总皂苷提取工艺中，以西洋参总皂苷、人参皂苷Rg1、Re、Rb1为指标，采用单因素试验筛选醇提次数，采用均匀实验以及多指标层次分析法优选出西洋参总皂苷醇提工艺；以西洋参总多糖为指标，采用单因素试验、正交试验研究了西洋参总多糖提取工艺。在纯化工艺研究中，通过对不同类型大孔吸附树脂吸附及解吸性能的考察，优选出最佳树脂，并分别采用单因素试验、均匀试验和单因素试验、正交试验优选出西洋参总皂苷和总多糖的纯化工艺参数。
　　结果：（1）药材质量控制中，西洋参中总皂苷含量为6.29%，总多糖含量为3.50%，人参皂苷Rg1、Re、Rb1总含量均大于药典规定的2.0%，质量可控。并建立了西洋参的HPLC指纹图谱，标出了30个共有峰，相似度在0.925～0.995，12批药材聚成4类。（2）西洋参总皂苷醇提工艺为：采用12倍量的85%乙醇提取两次，每次160min，合并提取液，滤过，浓缩。西洋参总多糖提取工艺为：液料比10:1，提取3次，每次1.5h。（3）分别选用D101、HPD600作为纯化西洋参总皂苷和总多糖的最佳树脂，总皂苷优选的纯化工艺为：上样浓度为14.84mg?ml-1，上样流速为1.0ml?min-1，径高比1:10，水洗体积3BV，洗脱剂为80%乙醇，洗脱剂用量为200ml，西洋参总皂苷纯度为57.45%。总多糖的纯化工艺为：上样浓度为2.74 mg?ml-1，PH为8.0，上样流速为2.0 ml?min-1，径高比为1:8，最大上样量为3.0BV，洗脱剂为30%乙醇，洗脱剂PH为8.0，洗脱流速为1.0 ml?min-1，洗脱剂用量为3.0BV，西洋参总多糖纯度为47.94%。
　　结论：通过对西洋参总皂苷、总多糖提取纯化工艺的研究，优选的提取纯化工艺可行，制得总皂苷、总多糖质量稳定可控。

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前言

第一章 5批西洋参药材质量控制研究

1. 仪器与试药

2. 5批西洋参药材中人参皂苷Rg1、Re、Rb1含量测定

3 5批西洋参中总皂苷含量测定[10-11]

4 5批西洋参中总多糖含量测定

5 小结

第二章 12批西洋参药材HPLC指纹图谱的研究

1 仪器、试药与材料

2 方法与结果

3 小结

第三章 西洋参总皂苷提取纯化工艺研究

1 仪器与试药

2 西洋参总皂苷提取工艺优选

3 西洋参总皂苷纯化工艺研究[32-40]

4 小结

第四章 西洋参总多糖提取纯化工艺研究

1 仪器与试药

2 西洋参总多糖提取工艺

3 多糖除蛋白单因素考察

4 西洋参总多糖纯化工艺研究

第五章 结果

1 西洋参药材质量控制研究

2 西洋参指纹图谱研究

3 提取纯化工艺研究

第六章 讨论

1 西洋参药材质量控制

2 均匀试验多指标层次分析法优选西洋参皂苷类成分提取工艺

3 纯化

致谢

参考文献

附录1 附图

附录2 文献综述: 西洋参免疫调节组分总皂苷、总多糖研究进展

附录3 论文发表情况