自制复方青珠抗瘢痕膏对巴马小型猪皮肤瘢痕的影响

摘要

目的：采用巴马小型猪构建猪背皮肤瘢痕模型，并使用自制复方青珠抗瘢痕膏（青蒿琥酯和珍珠水解液）作用于皮肤瘢痕，观察用药疗效并检测瘢痕组织中I、III型胶原表达的情况。评价小型猪皮肤瘢痕模型在抗瘢痕药物研发中的应用价值，探索复方青珠抗瘢痕膏治疗模型皮肤瘢痕的效果。
　　方法：制备含青蒿琥酯和珍珠水解液的抗瘢痕制剂命名为复方青珠抗瘢痕膏。选取健康雌性4月龄巴马小型猪6只。采用自制温控烫伤仪（100℃、20s），于猪背部制备烫伤创面。烫伤制备后伤口暴露，不做特殊处理。动物随机将动物分为六组，分圈饲养：①未治疗组，②基质对照组，③珍珠水解液组，④青蒿琥酯组，⑤复方青珠抗瘢痕膏组，⑥硅酮凝胶组。于建模后第28日开始用药，2次/日，连续用药28日。建模后第56日处死动物，Nageschmidt法计算创面愈合率。切取瘢痕组织，收集标本。采用HE染色观察各组瘢痕上皮层、真皮层细胞及胶原纤维并显微镜下观察瘢痕的厚度（上皮至真皮固有层）。Masson三色胶原染色，观察胶原纤维束的排列情况及胶原纤维面密度计数。采取免疫组织化学方法检测各组瘢痕组织I、III型胶原蛋白的表达。荧光定量RT-PCR法检测各组瘢痕组织Ⅰ、Ⅲ型胶原纤维mRNA的表达水平。采用SPSS17.0统计软件对实验结果进行分析处理。
　　结果：1、连续用药28日后（烫伤制备后56天）未治疗组与膏体基质对照组瘢痕仍明显高出于皮肤表面，颜色较深红，质地坚韧。珍珠水解液组瘢痕略高出皮肤表面，触之质中等偏软，色泽较红。青蒿琥酯组、复方青珠抗瘢痕膏组瘢痕低平，质软，色接近正常肤色。硅酮凝胶组瘢痕变平，颜色更接近正常皮肤颜色，质地软，表面平滑。
　　2、HE染色可见珍珠水解液组、青蒿琥酯组、复方青珠膏组和硅酮凝胶组，出现不同程度的成纤维细胞数量减少，胶原纤维变稀疏，排列较整齐。其中，复方青珠抗瘢痕膏组效果最明显；未治疗组和基质对照组上皮层及真皮层排列紊乱且厚度增加明显，其中含有大量排列紊乱无章的胶原纤维，呈旋涡状排列。连续用药28天后，可以发现珍珠水解液组、青蒿琥酯组、复方青珠抗瘢痕膏组和硅酮凝胶组可以明显抑制瘢痕的生长，其中复方青珠抗瘢痕膏组和硅酮凝胶组效果明显。Masson三色胶原染色可见用药后各组瘢痕中胶原纤维的密度减少，未见明显的胶原漩涡及结节。
　　3、免疫组织化学法：I型胶原蛋白在复方青珠抗瘢痕膏组、青蒿琥酯组、珍珠水解液组和硅酮凝胶组中的表达均较未治疗组低，差异有统计学意义（P＜0.01）。基质组与未治疗组比较差异无统计学意义（P＞0.05）；而III型胶原蛋白的表达增加，复方青珠抗瘢痕膏组、青蒿琥酯组、珍珠水解液组和硅酮凝胶组与未治疗组比较，差异有统计学意义（P＜0.01），基质组与未治疗组比较差异无统计学意义（P＞0.05）。
　　4、荧光定量RT-PCR检测后显示：I型胶原mRNA表达水平明显下调，与未治疗组比较差异均有统计学差异（P＜0.01），基质组与未治疗组比较差异无统计学意义（P＞0.05）；而III型胶原的mRNA表达则呈不同程度的上升，与未治疗组比较，差异有统计学意义（P＜0.01），基质组与未治疗组比较差异无统计学意义（P＞0.05）。
　　结论：1、珍珠水解液组、青蒿琥酯组和复方青珠抗瘢痕膏组作用于猪背瘢痕后均可以抑制瘢痕的增生，其中以复方青珠抗瘢痕膏组效果最理想。
　　2、复方青珠抗瘢痕膏组可明显抑制猪背瘢痕组织中Ⅰ型胶原沉积，一定程度上促进Ⅲ型胶原分泌，使Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原的表达更接近于正常皮肤。

目录

封面

声明

个人简历

目录

英文缩略词表（Abbreviation)

中文摘要

英文摘要

前言

材料和方法

1. 实验仪器

2. 实验试剂

3、实验方法

4、统计学处理

结果

1、大体观察巴马小型猪建模情况

2、用药后巴马小型猪皮肤瘢痕情况及瘢痕创面愈合率

3、光镜下各组瘢痕苏木精-伊红（HE）染色形态结果及瘢痕厚度

4、光镜下各组瘢痕丽春红酸性品红-苯胺蓝法（Masson三色法）染色形态结果及胶原纤维的面密度AA

5、S-P法免疫组织化学染色巴马小型猪皮肤瘢痕模型组织不同用药分组中CollagenⅠ和CollagenⅢ的表达情况

7、采用荧光定量RT-PCR法检测巴马小型猪瘢痕组织在不同用药组作用后CollagenⅠ和CollagenⅢmRNA的表达情况

讨论

全文总结

参考文献

综述: 病理性皮肤瘢痕的治疗进展

致谢