HBVS基因整合对CHB患者NAs治疗后血清HBsAg水平影响的研究

摘要

目的：CHB患者NAs抗病毒治疗的最终目标是实现cccDNA的清除，然而目前尚无能直接清除cccDNA的药物，根治CHB的目标还不现实。因此，实现功能性治愈就成为临床上CHB患者NAs抗病毒治疗的理想目标。功能性治愈的含义是:经过抗病毒治疗发生HBsAg清除/HBsAg血清学转换后，即使仍有少量没有转录活性的cccDNA残余，停药后仍能维持HBV DNA与HBsAg不反弹。由此可见，检测HBV cccDNA含量及其转录活性是判断CHB抗病毒疗效和功能性治愈的最理想指标。然而，检测HBV cccDNA的方法需要通过肝穿刺获取肝组织才能测定肝细胞HBV cccDNA含量，而这种有创性检查存在一定的风险和禁忌症，不容易被患者接受，难以常规应用。因此指南才采用与cccDNA密切相关的外周血HBsAg作为cccDNA的替代指标来制订终点标准。然而，14年的抗病毒治疗队列研究显示NAs治疗后10年HBsAg累计清除率仅有14％，如果仅以HBsAg清除为治疗终点，意味着绝大多数病人NAs治疗10年内都难以停药。在慢乙肝NAs抗病毒随访队列中，经过NAs抗病毒治疗获得完全病毒学应答，并维持应答至少3年后，大约80%的CHB患者HBsAg水平逐渐下降，而另外20%的患者HBsAg水平下降到一定水平后就基本不再下降，这些HBsAg水平不下降的患者中少部分即使停药4—5年也未见病毒学复发。提示：仅以HBsAg消失作为停药的终点标准是有局限性的。那么HBsAg的产生除了依赖cccDNA外，是否还有其他途径？我们推测，HBsAg除了主要由cccDNA转录表达外，还可能存在一条整合旁路。因此，本研究主要目的是利用我们的研究结果来证实HBsAg表达的不同机制；探讨HBV S基因整合对CHB患者NAs治疗后血清HBsAg水平的影响；为寻找能更可靠反映cccDNA转录活性的停药指标提供科学依据。
　　方法：本研究从课题组CHB患者NAs抗病毒治疗随访队列中选取70例符合以下标准的CHB患者：（1）符合《2010年中国慢乙肝防治指南》诊断标准的CHB患者；（2）基线采用NAs抗病毒治疗,半年内获得病毒学应答（HBV DNA<1000copy/ml），并维持3年以上；（3）基线行肝穿刺并冻存有肝组织；（4）在基线、抗病毒2年及抗病毒4年三个时间点保留有血清；（5）随访过程中未出现病毒学突破；（6）患者依从性好，资料完整，能定期随访。应用Alu-PCR法检测患者基线肝穿组织HBV S基因整合情况，并用罗氏试剂定量测定研究对象基线、NAs抗病毒治疗2年、抗病毒治疗4年时的血清HBsAg水平。将研究对象分为整合组与非整合组两组，应用T检验比较两组HBsAg水平均值差异，应用重复测量的方差分析方法比较两组HBsAg水平总体变化，秩和检验进行整合组与非整合组HBsAg水平下降幅度的比较，logistic回归及卡方检验分析可能影响HBV S基因整合的各基线因素。
　　结果：（1）70例CHB患者中有15.7%（11/70）发现存在HBV S基因整合。（2）HBV S基因整合是CHB患者NAs治疗2年后血清HBsAg水平下降明显减缓的重要影响因素。（3）整合组与非整合组在基线、抗病毒2年时HBsAg水平均值比较无明显差异，整合组抗病毒4年HBsAg水平均值比非整合组高。（4）抗病毒治疗2年整合组HBsAg水平下降幅度（log值）与非整合组相比无明显差异，抗病毒2年至4年非整合组HBsAg水平下降幅度（log）大于整合组。（5）亚组分析结果显示：性别、年龄、HBV感染家族史、HBV基因型、HBeAg状态对HBV S基因整合的影响无统计学意义。
　　结论：（1）部分CHB患者肝组织中存在HBV S基因整合现象。（2）基线肝组织HBV S基因整合可能是CHB患者NAs治疗获得完全病毒学，并维持应答2年后血清HBsAg水平下降不明显的重要原因。（3）整合的HBV S基因可能不依赖cccDNA独立表达HBsAg。(4)HBsAg消失作为临床治愈终点指标存在着局限性，不适合于有HBV S基因整合的CHB患者。