电针对局灶性脑梗死大鼠对侧大脑皮层及皮质脊髓束神经重塑的影响

摘要

目的:观察电针对单侧局灶性脑梗死大鼠梗死对侧大脑运动皮层神经生长相关蛋白-43（Growth-related protein-43，GAP-43）的表达分布及皮质脊髓束(Corticospinal tract，CST)神经纤维侧枝芽生的影响，并探讨其与大鼠运动功能恢复之间的关系。
　　方法:参照Longa改良线栓法行经右侧颈总动脉闭塞大脑中动脉（Middle cerebral artery occlusion，MCAO）的方法制备局灶性大脑皮层梗死大鼠疾病模型。根据Bederson4分5级法评估MCAO术后大鼠的神经功能，将其中评分为3-4分者选取作为实验用MCAO大鼠。随机选择3只MCAO术后造模成功的大鼠，于术后24h采用2％TTC染液进行脑组织切片染色，观察脑梗死灶位置。再随机选取84只MCAO大鼠分为GAP-43组、BDA组，每组又分为模型组和电针组。GAP-43组的模型组和电针组共48只大鼠，在MCAO术后3d、7d、14d、28d四个时间点分别进行4％多聚甲醛灌注后处死大鼠取脑组织，观察梗死灶情况，并采用免疫荧光染色法观察分析梗死对侧大脑皮层GAP-43蛋白的表达及分布。BDA组的模型组和电针组共36只大鼠，每组分为3个亚组，MCAO术后24h内、7d、14d分别进行左侧大脑运动皮层生物素葡聚糖胺(Biotin dextran amine，BDA)颅内注射，所有亚组均于注射后14天，即MCAO术后14d、21d、28d时进行4％多聚甲醛灌注后处死大鼠取颈髓组织，采用免疫组化自由漂片染色法进行BDA染色标记观察颈髓平面梗死对侧CST及CST神经纤维侧枝芽生跨越至梗死侧颈髓灰质区的纤维数和分布情况;并采用免疫荧光双标染色法观察梗死侧颈髓灰质区BDA/GAP-43共定位。BDA组的模型28d组和电针28d组分别在MCAO术前1d及术后3d、7d、14d、21d、28d，参考脚步错误试验评估大鼠左侧前肢的运动功能。另随机选取12只健康大鼠，仅分离颈总动脉、颈外动脉和颈内动脉，不插栓线，不结扎血管，分别作为上述GAP-43组和BDA组的假手术组，每组各6只。
　　结果:(1)TTC染色及4％多聚甲醛灌注后可见梗死灶位于大脑右侧，且梗死范围含盖了大脑皮层运动及感觉区。(2)与假手术组相比，MCAO术后3d时模型组大脑皮层GAP-43在第Ⅱ-Ⅲ层明显增多(P＜0.05)，持续增多至术后7d，差异有统计学意义(P＜0.05)，且术后7d与3d大脑皮层GAP-43阳性表达差异显著(P＜0.05);与模型组比较，电针组大脑皮层Ⅱ-Ⅲ层GAP-43阳性细胞在各时间点均有所增多(P＜0.05)。(3)电针组与模型组同期运动功能评分除术前1d和术后3d差异不显著(P＞0.05)，其他时间点差异明显(P＜0.05);电针组、模型组及假手术组梗死对侧CST纤维总计数差异无统计学意义(P＞0.05);与模型组相比，电针组各时间点跨越至梗死侧脊髓灰质区的BDA阳性纤维明显增多(P＜0.05)，其中14d组尤为明显(P＜0.01)，且BDA阳性纤维同时表达GAP-43;双变量相关分析显示，电针组各时间点大鼠运动功能的改善与其CST侧枝芽生纤维数量呈密切的正相关(14d组，r=0.867，P=0.025;21d组，r=0.841，P=0.036;28d组，r=0.864，P=0.026)。
　　结论:(1)改良线栓法行经右侧颈总动脉闭塞大脑中动脉的方法可以制备局灶性大脑皮层梗死大鼠疾病模型，且具有一定的简便性。(2)电针在一定程度上可以促进脑梗死大鼠对侧大脑运动皮层第Ⅱ-Ⅲ层次GAP-43蛋白的表达及CST侧枝芽生。(3)脑梗死大鼠梗死对侧CST侧枝芽生的纤维参与了脑梗死后运动功能的重建，电针对这种重建具有促进作用。(4)通过促进GAP-43的表达来诱导梗死对侧CST神经纤维侧枝芽生可能是电针治疗脑梗死后运动功能障碍的作用机制之一。

目录

声明

个人简历

英文缩略词表

摘要

前言

材料与方法

1 材料

2 方法

1 改良线栓法MCAO大脑梗死灶

2 运动功能评分

3 梗死对侧大脑皮层GAP-43表达及分布

4 梗死对侧大脑颈髓CST神经重塑

讨论

1．改良线栓法制备局灶性永久性脑梗死动物模型

2．脑梗死后梗死对侧大脑皮层神经重塑

3．脑梗死后颈髓平面梗死对侧CST神经重塑

结论

参考文献

综述 电针治疗缺血性脑卒中作用机制的研究进展

附图

致谢

攻读学位期间发表的学术论文