爱罗咳喘宁对COPD肺气虚大鼠IL-8、TNF-α和MIP-2水平及MUC5AC、AQP5基因表达的影响

摘要

目的:
　　观察爱罗咳喘宁方对慢性阻塞性肺疾病(Chronic Obstructive Pulmonary Disease,COPD)肺气虚证大鼠模型肺功能，血浆、肺组织匀浆和支气管肺泡灌洗液(Bronchial alveolar lavage fluid,BALF)中白细胞介素-8(Interleukin-8,IL-8)、肿瘤坏死因子-α(Tumor neerosis faetor-alpha,TNF-α)、巨噬细胞炎症蛋白-2(Macrophage inflammatory protein-2,MIP-2)含量，肺组织病理，黏蛋白5AC(Mucin5AC,MUC5AC)及水通道蛋白5(Aquaporin5,AQP5)基因表达的影响，探究爱罗咳喘宁对 COPD肺气虚证治疗的作用及其机制，给爱罗咳喘宁方的临床应用提供实验依据，为开发治疗COPD的中药提供新思路。
　　方法：
　　将60只Wistar大鼠随机分成6组，分别为正常对照组，模型组，爱罗咳喘宁低剂量（7.76 g·kg-1·d-1）组、中剂量（15.52 g·kg-1·d-1）组、高剂量（31.04 g·kg-1·d-1）组和急支糖浆（3 ml·d-1）组，每组10只。以烟熏加气管内滴注脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)制备COPD稳定期肺气虚证大鼠模型，分别给予相应药物干预；观察并记录大鼠一般状况，检测肺功能并取材。酶联免疫吸附法检测大鼠血浆、肺组织匀浆和支气管肺泡灌洗液中IL-8、TNF-α、MIP-2的含量，光镜下观察大鼠肺组织结构，原位杂交和免疫组化检测肺组织中MUC5AC、AQP5基因mRNA和蛋白表达。有关实验数据使用
　　SPSS13.0统计软件进行处理。
　　结果:
　　本研究制备COPD稳定期肺气虚证大鼠模型，以肺功能和病理学改变作为判定模型大鼠复制成功的依据。与正常组比较，模型组大鼠潮气量(TV)、呼气峰流速(PEF)、50％潮气量呼气流量(EF50)较正常组均明显降低（P＜0.01或 P＜0.05）；血浆 IL-8、TNF-ɑ和MIP-2因子含量均显著高于正常组（P＜0.01或P＜0.05），肺组织匀浆IL-8、TNF-ɑ和MIP-2因子含量均显著高于正常组（P＜0.01或P＜0.05），支气管肺泡灌洗液IL-8、TNF-ɑ和MIP-2因子含量均显著高于正常组（P＜0.01或P＜0.05）；模型组气管和肺组织中MUC5AC mRNA和蛋白表达均显著增强，AQP5 mRNA和蛋白表达均显著减弱，模型组MUC5AC蛋白和AQP5蛋白表达呈负相关(气管r=-0.528，P＜0.01；
　　肺组织r=-0.532，P＜0.01)。与模型组比较，爱罗咳喘宁低、中、高剂量组及急支糖浆组大鼠TV、PEF和EF50均显著升高（P＜0.01或P＜0.05）；血浆中IL-8、TNF-ɑ和MIP-2因子含量均显著低于模型组（均P＜0.01），肺组织匀浆IL-8、TNF-ɑ和MIP-2因子含量均显著低于模型组（P＜0.01或P＜0.05），BALF中IL-8、TNF-ɑ和MIP-2因子含量均显著低于模型组（均 P＜0.01）；爱罗咳喘宁中剂量组气管和肺组织中MUC5AC mRNA和蛋白表达均显著减弱，AQP5 mRNA和蛋白表达均显著增强，中剂量组 MUC5AC蛋白和AQP5蛋白表达呈负相关(气管 r=-0.485，P＜0.05；肺组织r=-0.491，P＜0.01)。模型组支气管管腔内出现渗出物，细支气管上皮有多处变性、坏死，管壁各层炎细胞浸润显著；黏膜下层黏液腺有增生、扩张；细支气管及其周围肺泡中出现较大面积炎性细胞浸润，可见局限性肺不张，病灶周围出现肺大泡。与模型组比较，爱罗咳喘宁低、中、高剂量组及急支糖浆组的病理学改变相对较轻，中剂量组修复最为明显。
　　结论：
　　1、爱罗咳喘宁能增强COPD肺气虚大鼠肺通气和换气功能，改善COPD稳定期大鼠肺气虚症状。
　　2、爱罗咳喘宁可显著减轻COPD肺气虚大鼠炎症反应，修复肺组织损伤，改善肺气虚症状。其机制可能通过抑制细胞因子IL-8、TNF-ɑ和MIP-2的分泌，阻止炎症的发展。
　　3、爱罗咳喘宁能抗气道黏液高分泌，具有化痰、祛痰作用。其机制可能通过下调MUC5AC、上调AQP5基因表达，调整黏液中黏蛋白与水的比例。
　　4、爱罗咳喘宁能显著减轻COPD稳定期肺气虚大鼠所产生的痰、喘等症状。其机制可能与抗气道炎症和抗黏液高分泌有关。

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前言

理论研究

1 COPD的中医研究

2 COPD的现代研究

实验研究

1 材料与方法

2 结果

3 讨论

4 结论

参考文献

致谢

附录1 病理图片

附录2 综述: COPD肺气虚证的中医及现代研究进展

附录3 在校期间论文论著和科研情况