化痰祛湿活血方干预非酒精性脂肪性肝炎大鼠ADPN/AKT/NF-kb通路的研究

摘要

目的：通过观察化痰祛湿活血方对非酒精性脂肪性肝炎大鼠血液生化指标、肝组织病理形态学改变以及 ADPN/AKT/NF-KB信号通路中关键蛋白 ADPN、AdipoR2、p-AKT（ser473）、p-NF-KBp65(ser536)表达的影响,探讨该方防治NASH可能的作用机理，为NASH的中医药防治及新药研发提供实验依据。
　　方法：取72只健康雄性 SPF级 SD大鼠，适应性喂养1周，后将其随机分为6组：空白组（E组）12只，予生理盐水按1ml/100g·d-1灌胃及基础饲料喂养；其余5组均自由饮水，并以高脂饲料（84％基础饲料＋1%胆固醇＋5%蛋黄粉+10%猪油）联合四环素腹腔注射造模（1次/周），首次注射量为10mg/100g鼠重，之后每次注射量为7mg/100g鼠重。模型组（F组）喂养如前；化痰祛湿活血方高剂量组（C组）5.04g/100g·d-1、中剂量组（B组）2.52/100g·d-1、低剂量组（A组）1.26/100g·d-1灌胃给药；多烯磷脂酰胆碱胶囊对照组（D组）0.0285g/100g·d-1灌胃给药。第8周结束，称重后处死全部大鼠，检测其肝功（ALT、AST、ALP）、血脂（TC、TG）、血糖（GLU）水平；观察肝湿重、肝指数，测定肝匀浆 FFA含量；肝组织病理学变化（HE染色）；免疫组化对ADPN、AdipoR2、p-AKT(ser473)、p-NF-KBp65(ser536)蛋白进行定位及半定量测定。
　　结果：
　　1．与空白组（E组）相比，模型组（F组）鼠重、肝湿重、肝指数、肝功（ALT、AST、ALP）、血脂（TC、TG）、血糖（GLU）及FFA含量均显著升高（P＜0.01），且 ADPN、AdipoR2、p-AKT(ser473)蛋白表达均显著降低（P＜0.01），p-NF-KBp65(ser536)蛋白含量显著升高（P＜0.01），病理（HE染色）显示为中重度脂肪变。
　　2．与模型组（F组）相比，各用药组鼠重、肝湿重、肝指数、肝功（ALT、AST、ALP）、血脂（TC、TG）、血糖（GLU）及FFA含量均有不同程度降低，其中以高剂量组（C组）疗效最为显著（P＜0.01）。且C组在上调ADPN、AdipoR2、p-AKT蛋白及下调p-NF-KBp65蛋白的表达上，除p-AKT指标表达与对照组疗效相当（P＞0.05）外，余指标均优于其它各用药组（P＜0.01）。
　　3．与对照组（D组）相比，高剂量组（C组）疗效明显优于D组；中剂量组（B组）在降低鼠重、肝湿重、肝指数、肝功（ALT、AST、ALP）、血脂（TC、TG）、血糖（GLU）及FFA含量方面与D组疗效相当（P＞0.05），并略优于低剂量组（A组）。在上调ADPN、AdipoR2、p-AKT蛋白的表达及下调p-NF-KBp65蛋白表达方面，B组与D组疗效相当（P＞0.05），且优于A组。
　　4．相关性分析显示，鼠重、肝湿重、肝指数、肝功（ALT、AST、ALP）、血脂（TC、TG）、血糖（GLU）及 FFA含量与 ADPN、AdipoR2、p-AKT呈现负相关，但与p-NF-KBp65呈正相关。化痰祛湿活血方抗击NASH的作用与其剂量呈正相关。
　　结论：
　　1．化痰祛湿活血方能有效改善NASH大鼠肝功、血脂等生化指标，调节脂质代谢，且高剂量组（C组）的疗效明显优于对照组（D组）。
　　2．化痰祛湿活血方剂量的大小与疗效存在量效关系，疗效次序即高剂量组（C组）＞中剂量组（B组）＞低剂量组（A组）。
　　3．化痰祛湿活血方通过上调肝组织中ADPN、AdipoR2、p-AKT(ser473)的表达，抑制 p-NF-KBp65(ser536)的表达，从而有效改善肝功能、血脂等生化指标，逆转 NASH大鼠肝组织脂肪变的程度，减轻肝脏炎症，推测这可能是其防治NASH的作用机制之一。

目录

封面

声明

目录

中文摘要

英文摘要

前言

材料与方法

1 实验材料

2实验方法

3 统计学处理

结果

1 大鼠的生长状况及肝脏组织学变化

2 大鼠血清ALT、AST、ALP的比较

3 大鼠血清TC、TG、GLU比较

4大鼠肝组织匀浆F FA含量的比较

5 大鼠肝组织病理学变化

6 大鼠肝组织ADPN、AdipoR2、p-AKT、p-NF-KBp65表达的免疫组化结果

7 大鼠肝组织ADPN、AdipoR2、p-AKT、p-NF-KBp65与鼠重、肝湿重、肝指数、ALT、AST、ALP、TG、TC、GLU、FFA相关性变化

理论探讨

1 中医学对非酒精性脂肪性肝炎的认识

2 现代医学对非酒精性脂肪性肝炎的认识

3 导师学术思想

4 化痰祛湿活血方及其药理研究

5 NASH动物模型

6 化痰祛湿活血方干预 NASH大鼠模型机制探讨

结论

致谢

参考文献

附录1：中英文词语对照

附录2 肝脏大体图片

附录3 病理图片

附录 4 免疫组化图片

附录5 文献综述: 非酒精性脂肪肝的中医药治疗研究进展

附录6 在校期间科研及发表论文