杨桃果总黄酮对L-NAME诱导的高血压大鼠心肌肥厚作用的研究

摘要

目的:观察杨桃果总黄酮对一氧化氮合酶抑制剂NG-硝基-L-精氨酸甲酯(NG-nitro-L-arginine-methlester，L-NAME)所导致的高血压大鼠降血压作用，以及对大鼠心脏，心肌组织的影响，探究其降血压机制。
　　方法:制备杨桃果总黄酮（total flavonoids of Averrhoa carambola L.fruit，TFACF）取新鲜杨桃果实榨汁，滤液加乙醇回流。石油醚，乙酸乙酯、正丁醇萃取。浓缩后，上大孔树脂富集，即可得到总黄酮。
　　正常大鼠用颈总动脉插管法从十二指肠给予生理盐水、TFACF低剂量、中剂量和高剂量（300mg·kg-1、600mg·kg-1、1200mg·kg-1）利用MPA多媒体生物信号记录系统测定收缩压(systolic blood pressure，SBP)和舒张压(diastolic blood pressure，DBP)。并观察各组，给药后1、5、10、20、60、90、120、180min时血压和心率的变化。
　　灌胃给予Wistar大鼠造模药一氧化氮合酶抑制剂(50 mg·kg-1·d-1)，连续给药4周，复制高血压模型。造模成功后筛选出SBP＞140mmHg和（或）DBP＞90mmHg的50只大鼠，按照随机数字表法，分为5组，即TFACF低剂量组（300 mg·kg-1·d-1）、TFACF中剂量组（600 mg·kg-1·d-1）、TFACF高剂量组(1200 mg·kg-1·d-1)，卡托普利组(10mg·mg·kg-1·d-1)，模型对照组每组10只。另取10只正常Wistar大鼠作为空白组。按照大鼠质量于每日固定时间灌胃给药一次，空白对照组及模型组给予等容积的蒸馏水。每周固定时间用ALC-nibl无创尾动脉压测定系统测定大鼠的尾动脉压和心率。
　　给药5周后，麻醉大鼠开腹，并从腹主动脉取血，摘取心脏，称取左室重量后并计算左室重量指数(left ventricular mass index，LVMD。采用ELISA法测定大鼠血清中AngⅡ、ET-1、IL-6和TNF-α浓度，用硝酸还原酶法测定血清中一氧化氮(NO)浓度，用硫代巴比妥酸(TBA)法测定大鼠血清中MDA的含量。心肌组织切片，进行HE染色和Masson染色。采用免疫组化法观察Ⅰ型胶原，Ⅲ型胶原，TNF-α，NF-κB，PPAR-γ在心肌组织中的表达情况。测定心肌组织中NF-κB mRNA的含量。
　　结果:十二指肠给药后5分钟出现降压作用，TFACF高、中、低三个给药组均在20分钟出现最大降压，SBP和DBP值与空白组相比有显著性差异(P＜0.05或P＜0.01)，其中高剂量组下降幅度最大，达到3 KPa且能持续40分钟。TFACF各剂量组均能剂量依赖性的降低SBP、DBP和MBP值。给药后120分钟各组血压逐渐上升。但对正常大鼠心率无影响。
　　给药5周之后，与模型组比较，杨桃果总黄酮各剂量组血压均有不同下降的程度。其中中剂量组和高剂量组在给药第1周后，血压就出现下降趋势(P＜0.05)，并且高剂量组在第4周开始血压维持在一个较稳定的水平。杨桃果总黄酮低剂量组在给药后的第2周，大鼠的血压开始有下降的趋势(P＜0.05)。但杨桃果总黄酮各剂量组和卡托普利组对心率影响不明显(P＞0.05)。
　　与模型组相比，卡托普利组和TFACF各剂量组的LVMI值有不同程度的降低，高剂量组差异具有显著性(P＜0.01)。卡托普利组和TFACF高剂量组血清中AngⅡ(P＜0.01)、ET-1(P＜0.01)、IL-6(P＜0.01)、MDA(P＜0.01)和TNF-α(P＜0.01)的含量均有所降低，NO含量有所升高(P＜0.01)。TFACF中剂量和低剂量组MDA和TNF-α的含量呈下降趋势(P＜0.05)，NO含量呈升高趋势，并呈现剂量依赖性的趋势。
　　HE染色结果观察到，卡托普利组和TFACF治疗组明显缓解心肌细胞肥大程度，心肌间质纤维组织基本正常。Masson染色观察到，TFACF低剂量组有少量心肌细胞间质胶原沉积，卡托普利组TFACF高中剂量组无明显胶原沉积(P＜0.05)。
　　TFACF中剂量组和低剂量组心肌组织有少量Ⅰ型胶原纤维化表现。但卡托普利组和TFACF高剂量组心肌组织Ⅰ型胶原蛋白的表达，明显降低(P＜0.01)。低剂量组心肌组织有少量Ⅲ型胶原纤维化表现。卡托普利组TFACF中剂量组和高剂量组心肌组织Ⅲ型胶原蛋白表达水平明显降低(P＜0.01)。
　　卡托普利组和TFACF高剂量组的大鼠心肌组织TNF-α蛋白表达降低，差异具有显著性(P＜0.05)。TFACF中剂量组和低剂量组也有部分TNF-α蛋白表达，但TFACF中剂量组明显少于低剂量组，对TNF-α的抑制呈现剂量的依赖性。
　　TFACF高剂量组和卡托普利组心肌组织的NF-κB蛋白表达，明显降低（P＜0.01)，差异具有显著性。但TFACF中剂量组和低剂量组心肌组织的NF-κB蛋白表达，与模型组相比，差异无统计学意义。
　　卡托普利组、TFACF各剂量组的心肌组织PPAR-γ蛋白表达，明显升高(P＜0.01)，差异具有显著性。与模型组比较，卡托普利组和TFACF高剂量组的心肌组织中NF-κB mRNA表达明显降低(P＜0.01)，差异具有显著性。
　　结论:杨桃果总黄酮对正常大鼠以及L-NAME诱导的高血压大鼠均具有降压作用，其机制可能与调节内源性缩血管活性物质ET-1、AngⅡ和舒血管活性物质NO之间的平衡，以及抑制IL-6和TNF-α改善炎症反应状态，上调PPAR-γ，抑制NF-κB信号通路进而发挥保护心肌细胞的作用有关。

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中英文缩略词表

摘要

前言

第一章 杨桃果总黄酮对正常大鼠的影响

第一节 杨桃果总黄酮对正常大鼠

1．材料

2．实验方法

3．结果

4 讨论

第二节 杨桃果总黄酮对正常大鼠心率的影响

1．材料

2．实验方法

3．结果

4 讨论

第二章 杨桃果总黄酮对高血压大鼠的影响

第一节 杨桃果总黄酮对高血压大鼠血压和心率的影晌

1．材料

2．实验方法

3．结果

4 讨论

1．材料

2．实验方法

3．结果

4．讨论

全文结论

参考文献

综述 中药提取物抑制高血压心肌肥厚的研究进展

致谢

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