补肺益肾方联合舒肺贴对COPD大鼠免疫球蛋白及T淋巴细胞亚群的影响

摘要

目的：
　　1、基于慢性阻塞性肺疾病（chronic obstructive pulmonary disease，COPD）稳定期大鼠模型，从肺功能、肺组织病理方面评价补肺益肾方联合舒肺贴的疗效。
　　2、观察补肺益肾方联合舒肺贴对COPD稳定期大鼠模型外周血、支气管肺泡灌洗液（broncho alveolar lavage fluid，BALF）中免疫球蛋白及T淋巴细胞亚群的影响。
　　方法：
　　SPF级SD大鼠72只随机分为空白组（CG）、模型组（MG）、穴位贴敷组（ASG）、补肺益肾组（BYG）、补肺益肾联合穴位贴敷组（BY+ASG，简称联合组）、氨茶碱组（AG），每组12只。采用香烟熏吸联合细菌反复感染的方法制备COPD稳定期大鼠模型。自第9周第1天，空白组和模型组以生理盐水灌胃联合模拟穴位贴敷；穴位贴敷组以生理盐水灌胃联合舒肺贴穴位贴敷；补肺益肾组以补肺益肾方灌胃联合模拟穴位贴敷；补肺益肾联合穴位贴敷组以补肺益肾方灌胃联合舒肺贴穴位贴敷；氨茶碱组以氨茶碱灌胃联合模拟穴位贴敷，给药至第20周结束后取材。采用非束缚全身体积描记系统（whole body plethysmography，WBP）每月检测大鼠肺功能，包括潮气量（tidal volume，TV）、呼气峰流速（peak expiratory flow，PEF）、50％潮气量呼气流量（50%tidal volume expiratory flow，EF50）。采用HE染色法观察肺组织病理。采用免疫比浊法检测大鼠血清及BALF中IgG、IgA、IgM水平；采用流式细胞术（flow cytometry，FCM）检测大鼠外周血及BALF中T淋巴细胞亚群水平。
　　结果：
　　1、一般情况
　　第4周开始，模型大鼠皮毛逐渐枯黄无光泽，精神萎靡，倦怠少动，呼吸浅促，进食饮水量减少。第9周用药后，上述症状逐渐减轻，以补肺益肾组和联合组尤为显著。第0周时，各组大鼠体重具有可比性（P>0.05）。第8周时，各组大鼠体重较空白组均有降低趋势（P>0.05）；模型组大鼠体重增长较空白组明显降低（P<0.01）。第20周时，模型组大鼠体重、第8-20周体重增长均较空白组明显降低（P<0.01）；各治疗组大鼠体重、第8-20周体重增长均较模型组升高（P<0.01），但各治疗组之间无明显统计学差异（P>0.05）。
　　2、肺功能
　　第4周起，模型组PEF、EF50均较空白组明显降低（P<0.01，P<0.05）。第8周起，模型组TV较空白组明显降低（P<0.01）。与模型组相比，第16周，穴位贴敷组、补肺益肾组、联合组、氨茶碱组TV均明显升高（P<0.01，P<0.05），补肺益肾组、联合组EF50升高（P<0.01，P<0.05）；第20周，补肺益肾组和联合组TV、PEF、EF50均升高（P<0.01，P<0.05），穴位贴敷组EF50升高（P<0.05），氨茶碱组TV升高（P<0.05）。
　　3、肺组织病理
　　空白组大鼠肺组织、气道结构完整。模型组肺组织可见肺泡壁断裂融合、肺泡腔扩大、炎症细胞浸润、肺气肿征象明显。穴位贴敷组、补肺益肾组、联合组及氨茶碱组上述病理改变均不同程度改善，其中补肺益肾组和联合组在改善肺泡和气管壁结构方面略显优势。
　　4、血清中IgA、IgG、IgM水平
　　模型组IgA、IgG、IgM水平较空白组明显降低（P<0.01）。与模型组相比，穴位贴敷组、补肺益肾组、联合组、氨茶碱组IgA、IgG、IgM水平升高（P<0.05，P<0.01）。与氨茶碱组相比，补肺益肾组IgG、联合组IgA、IgG升高（P<0.05，P<0.01）。与穴位贴敷组相比，联合组 IgA、IgG较升高（P<0.05，P<0.01）。与补肺益肾组相比，联合组IgG明显升高（P<0.01）。
　　5、BALF中sIgA、IgG、IgM水平
　　模型组sIgA、IgG、IgM水平较空白组明显降低（P<0.01）。与模型组相比，各治疗组 sIgA、IgG水平明显升高（P<0.01）；补肺益肾组、联合组 IgM水平升高（P<0.05，P<0.01）。与氨茶碱组相比，联合组sIgA、IgG升高（P<0.05，P<0.01）。与穴位贴敷组相比，联合组sIgA、IgG升高（P<0.05，P<0.01）。与补肺益肾组相比，联合组IgG显著升高（P<0.01）。
　　6、外周血T淋巴细胞亚群的变化
　　模型组外周血中CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平较空白组明显降低（P<0.01），CD8+水平明显升高（P<0.01）。与模型组相比，穴位贴敷组、补肺益肾组、联合组和氨茶碱组 CD4+/CD8+水平升高（P<0.05，P<0.01），CD8+水平明显降低（P<0.01）；补肺益肾组、联合组CD4+水平明显升高（P<0.01）；联合组CD3+水平升高（P<0.05）。与氨茶碱组相比，补肺益肾组 CD4+、CD4+/CD8+水平升高（P<0.05）；联合组CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平升高（P<0.05，P<0.01），CD8+水平降低（P<0.05）。与穴位贴敷组相比，联合组 CD4+、CD4+/CD8+水平升高（P<0.05，P<0.01），CD8+水平降低（P<0.05）。
　　7、BALF中T淋巴细胞亚群的变化
　　模型组BALF中CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平较空白组明显降低（P<0.01），CD8+水平明显升高（P<0.01）。与模型组比较，穴位贴敷组、补肺益肾组、联合组和氨茶碱组 CD4+、CD4+/CD8+水平明显升高（P<0.01），CD8+水平降低（P<0.01，P<0.05）；补肺益肾组和联合组 CD3+明显升高（P<0.01）。与氨茶碱组相比，补肺益肾组CD4+、CD4+/CD8+水平升高（P<0.05）；联合组CD4+、CD4+/CD8+水平升高（P<0.05，P<0.01），CD8+水平下降（P<0.05）。与穴位贴敷组相比，联合组 CD4+、CD4+/CD8+水平升高（P<0.01，P<0.05），CD8+水平下降（P<0.05）。联合组CD4+、CD4+/CD8+水平较补肺益肾组升高（P<0.05）。
　　结论：
　　1、补肺益肾方联合舒肺贴治疗 COPD稳定期具有较好的疗效，可明显改善大鼠一般状况、肺功能及肺组织病理损伤。
　　2、补肺益肾方联合舒肺贴可明显提高COPD大鼠免疫球蛋白水平，改善T淋巴细胞亚群，从而改善机体免疫功能。

目录

封面

声明

目录

中文摘要

英文摘要

缩略词

前言

材料和方法

1材 料

2方 法

3指标测定

4统计学方法

结果

1 一般情况

2 肺功能

3 肺组织病理

4 血清中IgA、IgG、IgM水平

5 BALF中sIgA、IgG、IgM水平

6 外周血T淋巴细胞亚群水平

7 BALF中T淋巴细胞亚群水平

讨论

1 中医学对COPD稳定期的认识

2 COPD稳定期免疫功能的变化

3 补肺益肾方联合舒肺贴对COPD大鼠整体状况的影响

4 补肺益肾方联合舒肺贴对COPD大鼠肺功能的影响

5 补肺益肾方联合舒肺贴对COPD大鼠IgG、IgA、IgM的影响

6 补肺益肾方联合舒肺贴对COPD大鼠T淋巴细胞亚群的影响

结论

致谢

参考文献

附录1病理照片（HE染色）

附录2文献综述: 中医外治法治疗慢性阻塞性肺疾病稳定期的研究进展

附录3在校期间论文、科研情况