miR-146a对甲状腺相关眼病眼眶成纤维细胞IL-6和IL-8的调节作用

摘要

研究目的:通过过表达或抑制离体培养的眼眶成纤维细胞miR-146a的表达，探讨miR-146a对甲状腺相关眼病眼眶成纤维细胞IL-6和IL-8的调节作用。
　　研究方法:本研究设实验组和对照组两组，实验组眼眶球后结缔组织样本来自2016年4月-2017年5月，在广西医科大学第一附属医院因暴露性角膜炎、压迫性视神经病变或限制性眼外肌病变行眼眶减压术或斜视矫正术的甲状腺相关眼病患者6例，对照组眼眶结缔组织取自因眼外伤等原因引起眼球萎缩行眼球摘除术及义眼座植入术以及二期义眼座植入术患者6例。通过原代细胞培养技术获得体外培养眼眶成纤维细胞，再利用携带目的基因的慢病毒转染眼眶成纤维细胞，过表达或抑制眼眶成纤维细胞miR-146a的表达水平，进而通过ELISA法检测IL-6和IL-8的表达水平，其检测结果用SPSS20.0对数据进行统计学分析，P＜0.05为差异具有统计学意义。
　　研究结果:(1)甲状腺相关眼病患者与正常人的眼眶成纤维细胞在体外均较易生长，并且形态上未见明显差异。生长曲线显示培养的细胞具有正常的分裂增殖特性，呈S型。免疫组织化学染色鉴定结果显示:vimentin(+)，desrmin（-），myoglobin（-），keralin（-），S100(-)。(2)慢病毒转染眼眶成纤维细胞，当MOI=50时，慢病毒转染条件最优，转染效率＞90％，嘌呤霉素筛选最优浓度:3.5μg/ml。(3)TAO患者眼眶成纤维细胞48h上清液中IL-6和IL-8水平明显升高，结果与正常组有统计学差异(P＜0.05)。转染含miR-146a上调序列的慢病毒的正常人眼眶成纤维细胞，上清液中IL-6和IL-8水平明显下降，结果与NC-阴性组有统计学差异(P＜0.05);转染含miR-146a下调序列的慢病毒的正常人眼眶成纤维细胞，上清液中IL-8水平明显升高，结果与NC-阴性组有统计学差异(P＜0.05)，然而，IL-6水平与NC-阴性组没有统计学差异(P=0.306)。转染含miR-146a上调序列的慢病毒的TAO患者眼眶成纤维细胞，上清液中IL-6和IL-8水平明显下降，结果与TAO-阴性组有统计学差异(P＜0.05)，同时，转染含miR-146a下调序列的慢病毒的TAO患者眼眶成纤维细胞，上清液中IL-6和IL-8水平明显升高，结果与TAO-阴性组同样有统计学差异(P＜0.05)。
　　研究结论:利用原代细胞培养技术可以获得纯化的眼眶成纤维细胞，一定条件下，携带目的基因的慢病毒可以转染离体培养的眼眶成纤维细胞，过表达miR-146a可抑制眼眶成纤维细胞中IL-6和IL-8的表达，同时抑制miR-146a可促进眼眶成纤维细胞中IL-6和IL-8的表达。提示miR-146a可能与甲状腺相关眼病疾病的发生发展有关。

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