柿桃提取物对L--NAME诱导高血压大鼠的降压作用及相关机制的研究

摘要

目的：探究柿桃提取物对L-NAME（NG-硝基-左旋精氨酸甲酯盐酸盐）诱导的高血压SD大鼠的降压作用及可能的降压机制。 方法：(1)制备柿子叶水提物，酸杨桃果汁浓缩，把两者按比例混合，通过十二指肠给药于正常的SD大鼠，使用BL-420S系统检测给药前及给药后四小时内SD大鼠的颈动脉压。(2)借助L-NAME试剂来建立高血压大鼠模型，灌胃给药。一批鼠采用十二指肠给药途径，借助颈总动脉插管法与BL系统相连，进而对实验动物给药前、给药后4h内的SBP（收缩压）、DBP（舒张压）以及MBP（平均动脉压）进行测定。另一批鼠则采取连续4周灌胃给药干预，当实验动物清醒状态下，通过无创血压测量系统来对尾动脉压进行测量。(3)最后一次给药完成，通过水合氯醛对大鼠实施麻醉处理，并取血，然后进行血清分离操作，分别借助硝酸还原酶法、羟胺法、TBA（硫代巴比妥酸）法以及比色法分别对实验动物血清中的一氧化氮(NO)、T-SOD（总超氧化物歧化酶）、MDA（丙二醛）、T-AOC（总抗氧化能力）进行检测，同时借助ELISA试剂盒对含NE（去甲肾上腺素）、ET-1（内皮素1）、Ang-Ⅱ（血管紧张素Ⅱ）的量实施检测。(4)采血完毕后马上处死大鼠，摘下心脏，分离出左心室，依次精称心脏、左心室各自的重量，同时对左室重量指数(LVMI)进行计算，切取一部分左心室并用10％福尔马林溶液固定，实施HE、Masson染色。免疫组化法对心肌中NF-κB（核转录因子）、TGF-β1（转化生长因子β1）、TNF-α（肿瘤坏死因子α）的表达进行半定量。另一部分左心室通过ELISA法测定TNF-α和TGF-β1的含量，(5)将肾脏取下，通过肾门横断面将一片组织（2-3mm厚度）切下，通过福尔马林溶液(10％)实施固定处理，完成HE、Masson染色，借助免疫组化法半定量分析NF-κB、TGF-β1与TNF-α在肾脏内的表达。 结果：(1)正常健康SD大鼠受到柿桃提取物的作用，血压值与给药前相比，显著下降(P＜0.05)，且剂量越大，血压下降程度越大。(2)通过十二指肠给不同剂量的柿桃提取物于L-NAME诱发的高血压大鼠，大鼠检测的SBP、DBP以及MBP与给药前相比，都在显著地降低(P＜0.05)。(3)通过灌胃给柿桃提取物于L-NAME诱导的高血压大鼠，一周后卡托普利组、高剂量组、中剂量组的SBP、DBP、MBP开始下降;末次给药后，与模型组对比，卡托普利组、柿桃提取物各治疗组的血压全部明显下调(P＜0.05)。在进行给药干预时，各组实验动物体重均表现为缓缓升高，在体重指标上，组间对比未见明显差别。(4)经过4周给药干预，卡托普利组的LVMI比模型组明显减少(P＜0.05)，柿桃提取物各治疗组大鼠的LVMI也比模型组减少。(5)跟模型组对比，卡托普利组和高剂量组的血清内NO、T-AOC与T-SOD水平明显上调(P＜0.05)，中剂量组和低剂量组也呈现出上调的趋势。卡托普利组及柿桃提取物高、中剂量组血清内MDA、NE、ET-1、Ang-Ⅱ含量显著下调（P＜0.05），各治疗组心肌组织的TGF-β、TNF-α量显著下调(P＜0.05)。(6)免疫组化结果显示，各治疗组大鼠与模型组比较，心肌组织及肾脏组织中NF-κB、TGF-β1、TNF-α表达明显下降(P＜0.05)。(7)通过HE染色观察，跟模型组比较可见，柿桃提取物各治疗组大鼠的肾脏以及心肌细胞的诸多病理变化（包括细胞分布无规律性、溶解、断裂、肥大等）状况明显缓解。(8)通过Masson染色观察到模型组心肌、肾脏组织有较多蓝色纤维沉积，而柿桃提取物各治疗组的胶原沉积均有不同程度的减少，减少程度与剂量呈正相关。 结论：柿桃提取物可以使正常大鼠以及L-NAME诱发的高血压SD大鼠的SBP、DBP、MBP下降，并可显著改善高血压大鼠心肌、肾脏细胞的病理损伤情况和纤维化效应，其降压机制可能是增加NO的生成和释放、增加T-SOD、T-AOC，减少NE、Ang-Ⅱ和ET-1等内源性缩血管活性成分的释放、使细胞NF-κB、TGF-β1与TNF-α水平下调。