壮药三角泡不同提取物对2型糖尿病小鼠治疗作用的研究

摘要

目的： 研究壮药三角泡不同提取物对高脂高糖饮食（HFD）联合链脲佐菌素(STZ)诱导的2型糖尿病(T2DM)小鼠的降糖治疗作用、氧化应激及炎症损伤等方面的影响，并初步探讨其可能的作用机制，为其临床开发和应用提供实验依据。 方法： 1、模型的建立、分组及给药方法：本研究采用健康昆明种(KM)雄性小鼠70只建立糖尿病模型，先适应性喂养3天，随机取10只纳入正常组，喂予普通标准颗粒饲料，其余60只小鼠喂予高脂高糖饲料，共喂养40天。40天之后高糖高脂小鼠腹腔注射STZ(60mg·kg-i)，给药2次，每次间隔三天，一周后，禁食不禁水12h后，检测空腹血糖(FBG)。选取FBG大于11.1mmol·L-1的小鼠为造模成功的2型糖尿病小鼠。选取成模小鼠50只，按FBG值随机分为5组：模型组、二甲双胍组、三角泡乙醇提取物组、三角泡乙酸乙酯提取物组和三角泡正丁醇提取物组。模型组小鼠继续以高脂高糖饲料喂养，二甲双胍组和三角泡各提取物组各给予相应浓度的二甲双胍和三角泡不同提取物药液，每天给药1次，正常组小鼠继续以普通饲料喂养。 2、每日观察实验小鼠的状态变化，记录体重变化情况;每周尾静脉采血检测FBG各1次，并记录;给药14天时，禁食不禁水12h后，进行口服葡萄糖耐量实验(OGTT);血清样本采集后，进行脏器取材，计算脏器指数;收集各组小鼠的胰腺和肝脏组织样本，固定后切片，观察比较各组织病理形态学变化。 3、采用全自动生化分析仪检测采集的小鼠血清样本中总胆固醇(TC)、甘油三脂(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、白蛋白(ALB)、球蛋白(GLB)、总蛋白(TP)、尿素氮(BUN)、肌酐(CR)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)和碱性磷酸酶(ALP)的水平。 4、使用酶联免疫吸附法(ELISA)检测空腹血清胰岛素(FINS)、糖化血红蛋白（HbA1c）、炎症因子白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子（TNF-α）的变化，并计算胰岛素抵抗指数(IRI)。 5、使用生化试剂盒检测肝脏组织氧化因子超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)和谷胱甘肽过氧化酶(GSH-Px)水平的变化。 结果： 1、对一般症状的影响：与模型组比较，三角泡不同提取物组小鼠精神状态有好转，饮食、饮水、尿量减少，在一定程度上改善2型糖尿病小鼠的临床症状。 2、对血糖作用的影响：三角泡不同提取物对2型糖尿病小鼠的血糖均有下降作用。给药第7天时，正丁醇组小鼠FBG已下降较显著（P＜0.05），给药第14天时，各给药组小鼠FBG均显著下降（P＜0.01）;糖耐量实验结果显示，各给药组30min、60min、120min的血糖均有下降，120min时血糖值下降较快，总体下降趋势比二甲双胍组稍弱;与模型组比较，各给药组小鼠的HbA1c、IRI均有下降，乙酸乙酯组与正丁醇组的HbA1c显著下降(P＜0.05或P＜0.01)，各给药组IRI下降明显(P＜0.05)，对2型糖尿病长期的血糖控制有明显效果。 3、对脏器指数的影响：与模型组比较，三角泡不同提取物组小鼠胸腺及脾脏重量及其免疫指数变化不大，而乙酸乙酯组和正丁醇组小鼠的肝脏与肾脏重量及其指数均明显下降（P＜0.01）。 4、对血脂方面的影响：与正常组比较，模型组小鼠的TG、TC、LDLC、HDLC均出现明显异常（P＜0.01），三角泡不同提取物组小鼠TG、TC、LDLC、HDLC均有下降趋势，但差异不具显著性(P＞0.05)。 5、对肝肾功能的影响：与正常组比较，模型组小鼠的AST、ALT、ALP均显著升高(P＜0.01)，三角泡不同提取物组小鼠AST、ALT、ALP均有不同程度的下降，正丁醇组小鼠AST、ALT和ALP下降明显（P＜0.05）;模型组小鼠的ALB明显降低(P＜0.01)，GLB和TP有下降趋势，三角泡不同提取物能不同程度提高2型糖尿病小鼠的ALB、GLB和TP水平，乙酸乙酯组和正丁醇组小鼠ALB显著增加（P＜0.05）;肾功能指标显示，各实验组小鼠BUN和CR变化不大。 6、对组织结构的影响：HE染色结果显示，与模型组比较，三角泡不同提取物各给药组小鼠的胰腺和肝脏组织结构的损伤得到明显缓解。 7、对肝脏氧化因子的影响：与正常组比较，模型组小鼠的SOD显著下降（P＜0.05），MDA显著升高(P＜0.01)，三角泡不同提取物组SOD均有升高，MDA均有下降，乙酸乙酯组和正丁醇组SOD显著升高(P＜0.05)，乙醇提取物组和正丁醇组MDA显著降低（P＜0.05）;模型组小鼠GSH-PX稍有下降，GSH下降明显(P＜0.05)，三角泡不同提取物组GSH-PX和GSH均有不同程度的升高，乙酸乙酯组的GSH升高明显(P＜0.01)，正丁醇组与二甲双胍组GSH也显著升高(P＜0.05)。 8、对炎症因子的影响：三角泡不同提取物均不同程度降低血清IL-6和TNF-α含量，但未达到显著性差异(P＞0.05)。 结论： 三角泡不同提取物可以改善2型糖尿病小鼠的一般临床症状，改善机体的糖代谢水平，降低胰岛素抵抗，对肝功能起到改善作用，以及对胰岛细胞和肝脏细胞的损伤有缓解作用，此外还能一定程度减轻2型糖尿病小鼠的氧化损伤，改善其抗氧化能力，推测三角泡的降糖作用机制可能与调节机体糖代谢、保护胰岛功能及其抗氧化活性有关。三角泡三种不同提取物中，正丁醇组的治疗效果较为明显，有待进一步探讨与开发。