广西铁皮石斛良种组培快繁研究

摘要

铁皮石斛是我国传统名贵药材，为兰科石斛属附生草本植物，民间素有救命仙草之称，名列“中华九大仙草”之首。铁皮石斛自然分布于我国秦岭以南各省，自然繁殖成活率、生长缓慢，由于过度开采，目前野生资源已濒临灭绝，但市场需求量还在不断上升，进行大量人工栽培是解决这一矛盾的唯一途径。本文以广西骏捷生物科技有限公司多年筛选的广西铁皮石斛良种为材料进行组培研究，力求建立利于广西铁皮石斛的扩繁体系。实验结果如下（未标明品系名称的均为桂林品系）:
　　1、铁皮石斛种子以MS+NAA0.5mg/L+20％土豆汁培养基能诱导出高品质原球茎，原球茎的生长情况主要受播种密度影响。茎段诱导原球茎时，1/2MS+NAA0.05 mg/L+6-BA0.5mg/L+KT0.1mg/L+LH1.0g/L（水解乳蛋白）最有利，原球茎诱导率为31.8％。提高KT和LH的用量以及添加2，4-D后，茎段新生芽多数茎部膨大，但无原球茎诱导成功。
　　2、不同培养基培养原球茎，MS培养基中原球茎的增殖系数最高，广西三个品系均有不同程度分化，MS+NAA1.0mg/L+6-BA1.0mg/L+20％土豆汁对三个品系原球茎增殖均适用。
　　3、MS培养基比1/2MS培养基更利于原球茎分化，无玻璃化现象;在MS培养基中单独附加NAA诱导原球茎分化，浓度为0.2mg/L时分化状态最佳;NAA浓度不变，改变6-BA浓度诱导分化的实验中，6-BA浓度为0.3mg/L时最利于原球茎分化;添加高浓度KT不利于原球茎分化，其浓度应低于0.1mg/L更佳。最利于原球茎分化的培养基为MS+NAA0.5mg/L+6-BA0.5mg/L+KT0.1 mg/L，分化率为100％。
　　4、利用不同基本培养基进行壮苗，MS培养基中组培苗生长状态优于其他培养基。在MS培养基中单独附加NAA壮苗，不同品系生长情况不同，桂林品系在附加0.5mg/L的培养基中生长最好，组培苗嫩绿;白石山品系在附加0.3mg/L的培养基中生长状态最佳;容县品系在附加1.0mg/L的培养基中生长最迅速，说明不同品系铁皮石斛对生长素需求也不同;NAA与6-BA配合壮苗的实验中，综合三个品系的壮苗结果，培养基MS+NAA0.5 mg/L+6-BA0.5mg/L+20％土豆汁比较适用于三个品系壮苗，说明复合激素对铁皮石斛壮苗更有利。NAA与KT配合壮苗时组培苗均有不同程度褐化现象，比较来看，KT0.2mg/L配合不同浓度NAA的培养基组培苗更壮，生长也更迅速。在NAA、6-BA和KT三者共同壮苗时发现MS+NAA0.3 mg/L+6-BA0.5mg/L+KT0.2mg/L+20％土豆汁壮苗效果最佳。培养基中添加0.5g/L活性炭可以有效防止褐化，1.5g/L活性炭能促进组培苗生长。
　　5、适宜茎段诱导丛芽增殖的基本培养基为3/4MS，且新芽生长速度快，最利于茎段诱导丛芽。利用6-BA1.0mg/L与不同浓度NAA诱导丛芽，丛芽诱导率较低，在NAA浓度为0.4mg/L时增殖系数最大。KT0.1 mg/L与不同浓度6-BA诱导丛芽时，6-BA浓度为0.3～0.4mg/L范围内丛芽增殖系数最高，说明6-BA在一定范围内对铁皮石斛茎段诱导丛芽有利。不同浓度KT与0.4mg/L的6-BA诱导丛芽，当KT浓度达到0.8mg/L时丛芽诱导值最高。从本文结果来看，最利于茎段诱导丛芽的培养基为MS+6-BA0.3～0.4mg/L+KT0.1mg/L+LH1.0g/L，带芽茎段诱导丛芽效果比顶芽好，且茎段存活率较高，接种时把叶片去除且将茎段竖直插入培养基更利于丛芽萌发。
　　6、单独使用NAA诱导生根效果差，NAA与IBA配合生根可使根系粗壮，添加浓度高于0.1mg/L的6-BA后生根质量下降，本文利于广西铁皮石斛的培养基为MS+NAA1.0mg/L+IBA1.0mg/L+20％土豆汁或者MS+NAA1.0mg/L+IBA1.0mg/L+6-BA0.1 mg/L+20％土豆汁，诱导新根数平均超过3根，根系粗壮，生根效果好。
　　7、广西3个品系铁皮石斛多糖含量的测定结果显示:桂林铁皮石斛多糖含量最高，为32.16％，其甘露糖含量也最多，为25.616％，综合结果来看，桂林铁皮石斛品种优于其他两种，是较为优质的品种，值得推广。

目录

摘要

第一章 文献综述

1．1 药用价值

1．1．1 传世医书相关记载

1．1．2 现代医药研究成果

1．2 铁皮石斛组织培养的研究进展

1．2．1 铁皮石斛组织培养发展史

1．2．2 材料的选用对铁皮石斛培养的影响

1．2．3 基本培养基对铁皮石斛组织培养的影响

1．2．4 植物生长调节剂对铁皮石斛组织培养的影响

1．2．5 有机添加物质对铁皮石斛组织培养的影响

1．2．6 碳源对铁皮石斛组织培养的影响

1．2．7 铁皮石斛组织培养过程中的其他影响要素

1．3 培养基成分

1．4 铁皮石斛多糖含量的测定

1．5 研究意义

第二章 方法

2．1 材料

2．2 仪器与设备

2．3 试剂

2．4 培养条件

2．5 技术路线

2．6 方法

2．6．1 铁皮石斛原球茎诱导

2．6．2 铁皮石斛基本培养基的选定

2．6．3 铁皮石斛原球茎的增殖

2．6．4 铁皮石斛原球茎的分化

2．6．4 铁皮石斛壮苗

2．6．5 铁皮石斛茎段诱导丛芽

2．6．6 铁皮石斛生根

2．7 铁皮石斛多糖测定

2．7．1 多糖含量测定

2．7．2 甘露糖含量测定

第三章 结果与分析

3．1 铁皮石斛原球茎的诱导

3．1．1 铁皮石斛种子诱导原球茎的结果

3．1．2 6-BA对茎段诱导原球茎的影响

3．1．3 KT对茎段增殖、脱分化膨大的影响

3．1．4 2，4-D对茎段增殖、脱分化膨大的影响

3．1．5 LH对茎段增殖、脱分化膨大的影响

3．1．6 原球茎诱导小结

3．2 铁皮石斛原球茎的增殖

3．3 铁皮石斛原球茎的分化

3．3．1 培养基对原球茎分化的影响

3．3．2 NAA对原球茎分化的影响

3．3．3 6-BA对原球茎分化的影响

3．3．4 NAA+6-BA+KT对原球茎分化的影响

3．3．5 原球茎分化小结

3．4 铁皮石斛壮苗

3．4．1 基本培养基对壮苗的影响

3．4．2 NAA对壮苗的影响

3．4．3 6-BA对铁皮石斛壮苗的影响

3．4．4 NAA和KT对壮苗的影响

3．4．5 综合NAA、6-BA和KT对壮苗的影响

3．4．6 活性炭对壮苗过程中防止褐化的作用

3．4．7 壮苗小结

3．5 铁皮石斛茎段诱导丛芽

3．5．1 基本培养基对茎段诱导丛芽的影响

3．5．2 NAA对茎段诱导丛芽的影响

3．5．3 6-BA对茎段诱导丛芽的影响

3．5．4 KT对茎段诱导丛芽的影响

3．5．5 接种部位对诱导丛芽的影响

3．5．6 叶片处理方式对诱导丛芽的影响

3．5．7 接种方式对诱导丛芽的影响

3．5．8 茎段诱导丛芽的小结

3．6 生根

3．6．1 NAA和IBA对生根的影响

3．6．2 添加低浓度6-BA对生根的影响

3．6．3 生根小结

3．7 铁皮石斛组培苗大棚种植

3．8 广西三种优良铁皮石斛多糖含量对比

3．8．1 广西三种组培铁皮石斛多糖含量对比

3．8．2 三种铁皮石斛甘露糖含量比较

第四章 讨论

4．1 铁皮石斛茎段诱导原球茎

4．2 铁皮石斛原球茎增殖

4．3 铁皮石斛原球茎分化

4．4 铁皮石斛壮苗

4．5 铁皮石斛茎段诱导丛芽

4．6 铁皮石斛生根

4．7 铁皮石斛多糖含量测定

第五章 结论

参考文献

彩图

附录

致谢

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