粗肋草的离体培养和快速繁殖技术的研究

摘要

本论文研究了粗肋草两个品种的离体培养和快速繁殖技术。主要从外植体的选择与消毒灭菌、愈伤组织的诱导、愈伤组织分化、丛生芽的诱导、丛生芽的增殖、试管苗的生根与移栽等方面进行研究，并探讨影响各技术环节的相关因素。主要结果如下：
　　 1、复合灭菌剂配合使用的灭菌效果优于单一灭菌剂，粗肋草叶片、花苞和叶柄较适宜的灭菌处理为：10％NaClO5min+0.1％HgCl210min；黑美人带腋芽的茎段较适宜的灭菌处理为：10％NaClO8min+0.1％HgCl220min，银皇后带腋芽茎段较适宜的灭菌处理为：10％NaClO8min+0.1％HgCl222min。
　　 2、以两个品种的叶片、花苞和叶柄为外植体，研究不同因素对愈伤组织诱导的影响，包括基本培养基类型、光照条件、植物生长调节剂和C源等。五种基本培养基对粗肋草愈伤组织诱导的效果：1/2MS>MS>N6>B5>White。对接种后的叶片、花苞、叶柄暗培养10d再进行光照培养，可提高愈伤组织诱导率。三种不同C源对愈伤组织的诱导效果：蔗糖>葡萄糖>麦芽糖。愈伤组织诱导适宜培养基为1/2MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.1mg/L，在此培养基中两个品种三个不同部位的外植体愈伤组织诱导率均达到最高。三个不同部位的诱导率存在差异，叶柄>花苞>叶片。
　　 3、粗肋草叶片、花苞诱导出的愈伤组织未分化出不定芽，叶柄诱导的愈伤组织在1/2MS+6-BA1.0mg/L+KT1.0mg/L+NAA0.1mg/L培养基上能分化出不定芽，但诱导分化率却极低。
　　 4、采用水平放置的接种方式较适宜带侧芽的茎段丛生芽的诱导：黑美人茎段丛生芽诱导最佳培养基为：MS+6-BA3.0mg/L+NAA0.1mg/L，在此处理中诱导率为91.24％，平均生成芽数7.65个。银皇后茎段丛生芽诱导最佳培养基为：MS+6-BA3.0mg/L+NAA0.15mg/L，此处理中的诱导率为88.84％，平均生成芽数6.69个。两品种叶片、花苞和叶柄诱导出的愈伤组织较难分化成苗，带侧芽的茎段在诱导培养基上较易诱导出丛生芽，这说明粗肋草的增殖方式是以带侧芽的茎段萌发形成不定芽然后诱导形成丛生芽为主。
　　 5、三种基本培养基对粗肋草丛生芽的增殖效果以MS最佳，Miller次之，White最差。黑美人的芽增殖倍数在这三类培养基中依次为：4.68、2.27、2.02；银皇后的芽增殖倍数依次为：3.86、2.19、1.90。
　　 6、黑美人丛生芽增殖的适宜培养基为：MS+6-BA3.0mg/L+KT2.0mg/L+NAA0.05mg/L，增殖倍数为5.87；银皇后丛生芽增殖适宜的培养基为：MS+6-BA3.5mg/L+KT1.5mg/L+NAA0.05mg/L，增殖倍数为4.65。
　　 7、不同细胞分裂素种类对粗肋草芽增殖和壮苗的效果不同。KT在壮苗方面起主要作用；6-BA在芽增殖方面起主要作用。
　　 8、黑美人在第五代达到最大增殖倍数6.43倍，银皇后在第四代达到最大增殖倍数5.36倍。芽增殖倍数比较：黑美人>银皇后。
　　 9、基本培养基1/2MS比MS更利于粗肋草的生根。
　　 10、生长激素NAA、IBA浓度均以0.2mg/L时，适宜黑美人的生根培养；生长激素NAA、IBA浓度均以0.3mg/L时，适宜银皇后的生根培养。两种生长激素比较，在相同浓度条件下NAA的生根效果优于IBA。
　　 11、单一基质比较：泥炭>木屑>菜园土>细沙>黄泥，黑美人品种在泥炭中的成活率为92.57％，银皇后为90.02％。复合基质效果优于单一基质，木屑1/2+珍珠岩1/4+菜园土1/4是粗肋草两个品种较为理想栽培基质。在此复合基质中，黑美人品种成活率为98.23％，银皇后为95.90％。品种间移栽成活率、抗逆性、适应力比较：黑美人>银皇后。