铁皮石斛离体培养诱导开花的研究

摘要

铁皮石斛因具有很好的药用价值且难于自然繁殖，随着大量的采掘己使得野生铁皮石斛资源濒临灭绝。应用植物组织培养技术，对铁皮石斛离体培养进行种质保存和快速繁殖具有非常重要的意义。特别是通过离体培养研究有关开花机理，具有着重要的现实意义和应用价值。本实验利用植物组织培养技术，通过各种激素及其配比组合处理广西铁皮石斛无根试管苗，诱导其生根和开花，研究影响铁皮石斛试管开花的调控因子。本论文探讨了MS、Miller、White三种不同基本培养基和三种不同添加物对石斛继代增殖的影响，激素IBA、NAA、ABT及其组合对铁皮石斛生根诱导的影响，以及6-BA、NAA、KT、PP333、TDZ等激素和预处理条件对石斛组培苗花芽分化和花朵开放率的影响。本实验还采用了石蜡切片的方法，在细胞水平上对铁皮石斛花芽分化的过程进行了形态学观察，研究铁皮石斛试管苗花芽发生、发育的进程。研究结果表明：
　　 1．在三种基本培养基对铁皮石斛试管苗芽增殖影响的比较试验中，以MS基本培养基对铁皮石斛芽的增殖效果最好，芽增殖倍数为3.5倍，且增殖芽的素质最好，芽粗壮、叶色浓绿。
　　 2．在不同添加物对铁皮石斛芽增殖影响的比较试验中，以添加CPPU0.5mg/L的处理增殖效果最佳，芽增殖的倍数达到5.79倍，但是芽的素质一般。添加KT0.5mg/L的处理芽增殖的倍数达到4.58倍，芽的素质一般。添加有椰汁的处理增殖芽的素质较佳，表现为芽粗、健壮、叶色浓绿，其芽增殖的倍数达到4.17倍。
　　 3．在不同激素对铁皮石斛生根诱导效果的影响的比较试验中，以培养基1/2MS+IBA4.0mg/L+PP3330.5mg/L对铁皮石斛芽生根诱导的效果最好，生根率可达到100％，平均生根数为7.44条，平均根长为1.73cm。
　　 4．在单因子激素对铁皮石斛组培苗花芽诱导的效果的比较试验中，以培养基MS+TDZ0.06mg/L对铁皮石斛组培苗花芽诱导的效果最好，其花芽形成率可达到15.5％，而花开放率可达到90.2％，平均每个具花株的花苞数为2.1朵。
　　 5．在双因子激素对铁皮石斛组培苗花芽诱导的效果的比较试验中，以培养基MS+PP3330.3mg/L+TDZ0.06mg/L对铁皮石斛芽开花诱导的效果最好，其花芽形成率可达到25.2％，而花开放率可达到70.2％，平均每个具花株的花苞数为3.7朵。
　　 6．在多因子激素对铁皮石斛组培苗花芽诱导的效果的比较试验中，以培养基MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.5mg/L+PP3330.3mg/L+TDZ0.06mg/L对铁皮石斛芽开花诱导的效果最好，其花芽形成率可达到80.4％，而花开放率可达到93.3％，平均每个具花株的花苞数为12.3朵。
　　 7．在激素预培养实验中，以由培养基MS+TDZ0.06mg/L+PP3330.5mg/L预培养40天再转入诱导开花培养基MS+KT1.0mg/L+ NAA0.5mg/L+PP3330.5mg/L的处理对石斛试管花控效果最好，其花芽形成率可达到78.0％，而花开放率可达到97.8％，平均每个具花株的花苞数为7.89朵。
　　 8．在培养基中不同含糖量对铁皮石斛组培苗花芽诱导的效果的比较试验中，以培养基含糖量为50g/L时对铁皮石斛芽开花诱导的效果最好，其花芽形成率可达到87.8％，而花开放率可达到96.8％，平均每个具花株的花苞数为13.7朵。
　　 9．在铁皮石斛组培苗是否有根对铁皮石斛试管开花影响的比较试验中，无根的组培苗花芽诱导的效果要明显好于有根的组培苗。
　　 10.在利用石蜡切片对铁皮石斛花芽分化进行解剖观察的试验中，获得了铁皮石斛花芽分化的永久制片，首次系统地观察到铁皮石斛花芽分化的基本过程及各个阶段的主要特征。为进一步研究铁皮石斛试管开花及花期调控提供了理论依据。