德保矮马精液品质分析及冷冻保存研究

摘要

本研究以广西德保矮马(公马)为研究对象，首先通过采集及分析不同季节矮马的精液品质，掌握德保矮马精液品质的季节变化规律，以指导冻精生产及德保矮马的繁育；同时，研究开发德保矮马精液冷冻保存配方，通过基础配方的研究、冷冻剂的选择优化、营养物质的替代、维生素的添加等方面，对德保矮马精液冷冻稀释液配方进行优化，以期获得更高的冻精质量；另外，通过人工授精试验，验证冻精在实际生产应用的可行性，使之能广泛应用于矮马的保种和育种工作，迅速扩大矮马数量，保护这一濒危物种。取得的研究结果总结如下。
　　 1.通过综合评定其射精量、精子活力、密度、畸形率等指标的平均值，发现春季精液品质最好，且精子活力最高，畸形率也最低，其次是冬季、秋季，虽然夏季矮马射精量最大，但是活力低，密度小，畸形率高，精液品质最差，表明德保矮马精液品质呈现季节性差异。因此，冻精的生产制作保存最好选择在春季，以便能获得较高的精子冻后品质。
　　 2.比较了五种不同稀释液配方(配方编号分别为1、2、3、4、5)对德保矮马精液冷冻保存效果的影响。结果显示，配方2精子冻后活力显著高于其他4种配方(P<0.05)，精子冻后运动速率(VAP、VCL)也显著高于配方1、配方3、配方4(P<0.05)。因此，配方2对德保矮马的精液冷冻保存效果较好，故把配方2作为后续试验的基础配方。
　　 3.以配方2为基础配方，探讨甘油和二甲基酰胺(DMF)两种不同防冻保护剂冷冻保存德保矮马精液的效果，结果显示，在德保矮马精液冷冻稀释液中添加浓度5％DMF，精液冷冻保存效果显著优于添加6％的甘油(P<0.05)。
　　 4.探讨了在稀释液中分别添加不同浓度的大豆卵磷脂(1.5％、3.0％、4.5％、6.0％)替代卵黄的可行性。结果发现：与添加5％卵黄的对照组相比，低浓度(1.5％、3.0％)的大豆卵磷脂组精子冻后活力与对照组无显著差异(P>0.05)；高浓度大豆卵磷脂组(4.5％、6.0％)精子冻后活力显著低于对照组(P<0.05)；低浓度大豆卵磷脂组精子冻后运动速率(VAP、VSL、VCL)及顶体完整率显著高于对照组(P<0.05)；大豆卵磷脂各浓度组精子冻后畸形率显著高于对照组(P<0.05)，且精子解冻后体外存活时间显著低于对照组(P<0.05)。可见，矮马精液冷冻稀释液中大豆卵磷脂不宜用于替代卵黄。
　　 5.对在稀释液中添加维生素E和维生素C的精液冷冻保存效果进行了研究。在稀释液中添加600μg/ml的维生素E，精子冻后活力、顶体完整率及体外存活时间显著高于不添加的对照组(P<0.05)，特别是精子解冻后体外存活时间大大延长了，但精子冻后运动速率及畸形率与对照组相比差异不显著(P>0.05)。而添加维生素C各浓度组的精子冻后活力、运动速率、畸形率、顶体完整率与对照组都无显著性差异(P>0.05)，虽然解冻后精子体外存活时间显著高于对照组(P<0.05)，但提高程度不及添加维生素E的试验组。
　　 6.对冷冻精液的人工授精效果进行了研究。用经过优化后的德保矮马精液冷冻稀释液配方制作0.5ml规格的细管冻精，给16匹母马的22个情期进行了人工授精，经直肠妊娠检查后，最后确定有7匹母马怀孕，总情期受胎率为31.8％。表明德保矮马冷冻精液能使母马成功受孕。尽管受胎率低，但这受多种因素影响，提高德保矮马冻配受胎率还有待进一步的研究。
　　 以上结果表明：
　　 (1)德保矮马精液品质受季节影响，春季精液品质最好；
　　 (2)德保矮马精液冷冻稀释液中添加5％DMF的效果优于6％的甘油，能替代甘油作为矮马精液冷冻保存的抗冻剂；而且添加600μg/ml的维生素E能显著提高精子冻后质量；
　　 (3)优化后的德保矮马精液冷冻稀释液配方为：乳糖7.2g、葡萄糖3.6g、柠檬酸钠0.4g、卵黄5.0ml、DMF5.0ml、维生素E0.06g、青链霉素各10万单位(每100ml稀释液中的物质含量)；用该配方冷冻的德保矮马精液给母马进行人工授精后能使母马成功受孕。

目录

文摘

英文文摘

第一章 综述部分

1 前言

1.1 中国矮马起源与分布

1.2 德保矮马的品种特征

1.3 德保矮马现状

2 动物精液品质检查和评定的研究现状

2.1 精液外观

2.2 精子形态与结构

2.3 精子活力、运动参数及存活时间

2.4 精子质膜完整性

2.5 精子顶体

2.6 精子染色质完整性

2.7 精子线粒体活性

2.8 受精能力的检测

2.9 精清中与精液品质相关物质的检测

3 动物精液冷冻保存技术的研究概况

3.1 精液冷冻保存技术的发展历史

3.2 精液冷冻保存稀释液的研究概况

第二章 德保矮马精液品质分析及冷冻保存研究(试验部分)

1 前言

2 材料和方法

2.1 材料

2.2 试验方法

2.3 仪器及药品

2.4 试验设计

2.5 统计分析

3 结果与分析

3.1 不同季节对德保矮马精液品质的影响

3.2 比较5种不同冷冻配方对德保矮马精液冷冻保存效果的影响

3.3 对比两种不同防冻剂冷冻保存德保矮马精液的效果

3.4 添加人豆卵磷脂替代卵黄对德保矮马精液冷冻保存效果的影响

3.5 稀释液中添加维生素E或C对德保矮马精液冷冻保存效果的影响

3.6 德保矮马冷冻精液的人工授精效果

4 分析与讨论

4.1 不同季节对德保矮马精液品质的影响

4.2 五种不同稀释液配方对德保矮马精液冷冻保存效果的影响

4.3 比较两种不同防冻剂冷冻保存德保矮马精液的效果

4.4 添加大豆卵磷脂替代卵黄对德保矮马精液冷冻保存效果的影响

4.5 添加维生素E和维生素C对德保矮马精液冷冻保存效果的影响

4.6 德保矮马冷冻精液的人工授精效果

5结论

附录

图片与说明

致谢

研究生期间发表的论文