珠子草中木脂素分离方法的研究

摘要

珠子草中的木脂素因具有抗乙肝病毒活性而受到关注。本文分别采用快速柱色谱法和高速逆流色谱法对珠子草中的木脂素进行了分离。
　　采用快速柱色谱法、制备型薄层色谱法、“醇溶水沉法”、“酮溶水沉法”、重结晶等方法，从珠子草乙醇浸膏的石油醚段分离、纯化得到三个化合物，使用IR、MS、NMR等方法鉴定了它们的结构，分别为stereoisomer of niranthin（初步鉴定）、hypophyllanthin和phyllanthin。
　　采用高速逆流色谱法对珠子草乙醇浸膏的石油醚段进行分离。
　　首先考察了聚乙二醇(PEG，10000)对溶剂体系1正己烷∶乙酸乙酯∶甲醇∶水(3∶2∶3∶2，V/V)和溶剂体系2正己烷∶乙酸乙酯∶乙醇∶水(6∶4∶5.5∶5，V/V)分离效果的影响，结果表明影响不明显。
　　然后在不加PEG的条件下对溶剂体系1和溶剂体系2进行温度和转速的优化，得到两者的最佳分离条件，均为温度25℃、转速800r/min。在最佳分离条件下stereoisomer of niranthin和hypophyllanthin的分离度均大于1.5，达到完全分离，hypophyllanthin和phylanthin的分离度为0.952（溶剂体系1）和0.929（溶剂体系2）。因此，最佳分离条件为正己烷∶乙酸乙酯∶甲醇∶水(3∶2∶3∶2，V/V)，上相为固定相，下相为流动相，温度25℃，转速800r/min，流动相流速2mL/min。
　　最后在最佳分离条件下，尝试大进样量的分离效果。进样257.3mg，得到84.8mg stereoisomer ofniranthin、31.9mg hypophyllanthin和68.2mgphyllanthin，stereo isomer of niranthin和hypophyllanthin的分离度为1.506，达到完全分离，hypophyllanthin和phyllanthin的分离度为0.911，经HPLC检测纯度分别为69.97％、90.24％、86.78％。三个化合物和第二章的三个木脂素对应。结果显示，进样量增加后，在相同的分离条件下也可以达到很好的分离效果，适用于制备型分离。
　　本文采用快速柱色谱法和高速逆流色谱法分离同一样品，得到了相同的结果。和高速逆流色谱法相比，快速柱色谱法的优点是对仪器要求低，溶剂用量较少，缺点是不易发现含量少的组分，硅胶会吸附样品、造成损失。和快速柱色谱法相比，高速逆流色谱法的优点是灵敏度高、可发现含量少的组分，借助薄层色谱法(TLC)合并洗脱液相同组分的过程可视化（参考每个峰开始和结束的时间以及自动收集器的换管时间），样品几乎无损失，实验结果的重现性好、可增加进样量以实现制备型分离，缺点是溶剂体系的选择困难，溶剂用量大。

目录

声明

摘要

1．1 珠子草简介

1．2 木脂素概述

1．3 木脂素的活性

1．3．1 抗癌活性

1．3．2 抗炎活性

1．3．3 免疫抑制活性

1．3．4 抗氧化活性

1．3．5 抗真菌活性

1．3．6 抗HIV活性

1．3．7 认知增强与记忆保护活性

1．3．8 杀虫活性

1．3．9 抗HBV活性

1．4 木脂素的分离方法

1．4．1 柱色谱法

1．4．2 大孔树脂法

1．4．3 高效液相色谱法

1．4．4 胶束电动色谱法

1．4．5 高速逆流色谱法

1．5 本课题的研究目的、意义和内容

第二章 采用快速柱色谱法分离珠子草中的木脂素

2．1 试剂、仪器和材料

2．1．1 试剂

2．1．2 仪器

2．1．3 材料

2．2 珠子草中木脂素的提取和分离

2．2．1 珠子草石油醚段浸膏的制备

2．2．2 石油醚段浸膏的除色

2．2．3 结晶

2．2．4 采用快速柱色谱法分离晶体粗品中的木脂素

2．2．5 组分A、B、C的纯化

2．2．6 化合物的性质和结构数据

2．3 本章小结

第三章 采用高速逆流色谱法分离珠子草中的木脂素

3．1 试剂、仪器和材料

3．1．1 试剂

3．1．2 仪器

3．1．3 材料

3．2 HSCCC溶剂体系的选择

3．3 HSCCC条件的优化

3．3．1 PEG浓度对分离效果的影响

3．3．2 温度对分离效果的影响

3．3．3 转速对分离效果的影响

3．4 HSCCC溶剂体系的优化

3．4．1 HSCCC溶剂体系的比例选择

3．4．2 PEG浓度对分离效果的影响

3．4．3 温度对分离效果的影响

3．4．4 转速对分离效果的影响

3．5 讨论和应用

3．5．1 讨论

3．5．2 应用

3．6 本章小结

4．1 结论

4．2 展望

参考文献

附录

致谢

攻读硕士学位期间发表论文情况