广西部分家养反刍动物EHD血清学及传播媒介的调查与病原分离鉴定

摘要

鹿流行性出血热(epizootic hemorrhagic disease，EHD)是由呼肠孤病毒科环状病毒属鹿流行性出血热病毒(EHDV)引起的一种虫媒病毒病。广泛分布于热带和温带地区。
　　本研究采用针对EHDV群特异性抗原VP7蛋白设计的竞争ELISA(C-ELISA)抗体检测试剂盒在广西境内开展牛、羊反刍动物EHDV血清学调查。通过对广西8个县区217份山羊血清，313份黄牛血清进行检测，结果发现广西境内家养反刍动物普遍存在EHDV感染，总阳性率达到36.2％(192/530)，其中，黄牛的血清阳性率高达55％(172/313)，明显高于山羊(9.2％;20/217)。广西家养反刍动物EHDV感染具有地域差异和海拔高度的差异，表现为桂南地区明显高于桂北地区;平原地区＞丘陵地区＞山地地区。
　　为了解广西地区EHDV传播媒介库蠓的种类及优势群体，在血清学调查的基础上选择低海拔、高湿度、适宜媒介昆虫繁殖、EHDV血清学阳性率高且牛羊密集的广西马山县设立牛羊虫媒病监控点，在蚊虫活跃的八月底连续三天捕获媒介库蠓进行形态学及分子生物学鉴定。结果在所鉴定的326只库蠓中，以边缘库蠓(33.1％)和尖喙库蠓(27.3％)为优势库蠓。
　　通过在监控点筛选EHDV抗体阴性的10头牛和5只山羊作为哨兵动物，分别混养在EHDV抗体阳性的牛群及羊群中，采用白天放牧，夜间赶回栏舍的方式饲养。1～4月每月采血一次，5～12月每周采血一次，采用C-ELISA试剂盒监测其抗体转阳情况，取哨兵动物EHDV抗体转阳时间点及前、后两周的肝素钠抗凝血红细胞，采用直接接种BHK-21细胞及先在C6/36细胞传一代后再接BHK-21细胞两种方法同时分离EHDV。以RT-PCR、病毒中和试验等对分离株进行鉴定，结果在3头哨兵牛抗体转阳时间前后共8份血样中分离到3株病毒，TCID50分别为10-2.5/0.1mL，10-2.83/0.1 mL，10-2.5/0.1 mL，经血清型鉴定均为EHDV-5型。这是首次在广西牛群中分离到EHDV，说明广西反刍动物存在EHDV感染。

目录

声明

摘要

第一章 文献综述

1．1 鹿流行性出血热(EHD)流行与发病概况

1．1．1 鹿流行性出血热病毒(EHDV)

1．1．2 EHD全球的流行与分布

1．1．3 EHDV的易感动物及传播方式

1．1．4 EHDV的发病概况

1．2 EHD病原学研究

1．2．1 EHDV的分子生物学

1．2．2 EHDV分离与鉴定

1．2．3 EHDV的诊断

1．3 EHD经济损失与防控

1．3．1 经济损失

1．3．2 控制措施

1．4 研究目的与意义

第二章 广西部分地区EHDV血清学调查及监控点EHDV主要传播媒介库蠓的调查与鉴定

2．1 材料与方法

2．1．1 材料与试剂

2．1．2 方法

2．2 结果

2．2．1 广西境内EHDV血清学调查

2．2．2 广西监控点库蠓的调查与鉴定

2．2．3 广西监控点库蠓分毒

2．3 讨论

2．4 小结

第三章 EHDV广西株的分离与鉴定

3．1 材料与方法

3．1．1 材料与试剂

3．1．2 方法

3．2 结果

3．2．1 EHDV抗体检测结果

3．2．2 血细胞病毒核酸检测

3．2．3 病毒分离

3．2．4 病毒核酸检测

3．2．5 病毒形态学观察

3．2．6 病毒TCID50测定

3．2．7 病毒血清型鉴定

3．3 讨论

3．4 小结

第四章 全文总结

参考文献

附录

致谢

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