葡萄籽原花青素对奶牛抗氧化状况和酮病等指标的影响

摘要

奶牛机体的抗氧化能力与机体的健康水平息息相关，处于泌乳早期的高产奶牛易发生氧化应激，引起与氧化应激相关的疾病。提升奶牛机体的营养水平及监测机体的健康状况，对减少疾病的发生和疾病监测具有重要价值。葡萄籽原花青素(GSPE)属于多酚化合物，具有很强的抗氧化特性，作为奶牛饲料添加物鲜有报道。本研究进行三项试验，试验一探究GSPE对泌乳早期奶牛血浆抗氧化能力和酮病等指标的影响;试验二了解GSPE对牛奶抗氧化能力的影响，综合评价其对奶牛机体的作用;试验三筛选评价奶牛机体抗氧化状况的乳样指标。具体研究如下:试验一:葡萄籽原花青素对奶牛血浆抗氧化能力和酮病等指标的影响试验选择16头无临床疾病，泌乳天数、产奶量、体重、胎次、体况评分相近的泌乳早期奶牛，按完全随机设计分为4组(G0、G20、G40、G80)，每组随机接受1个试验处理，即饲喂0、20、40和80mg/kg BW/day的GSPE。于0h（灌喂前）、3h、6h、12h、24h、48h、72h、96h、120h、144h和168h采集血样，测定下列氧化/抗氧化指标:总抗氧化能力TAC（血浆铁还原力，法）、谷胱甘肽过氧化物酶GPX(DTNB法)、超氧化物歧化酶SOD（羟胺法）、丙二醛MDA(硫代巴比妥酸法)，过氧化氢H2O2（钼酸显色法）。检测酮病等指标:葡萄糖GLU（GOP-PAP法-双剂型）、游离脂肪酸NEFA（可见光比色法）及酮体KET（改良水杨醛比色法）。结果显示，与G0组相比，G20、G40、G80在血浆氧化抗氧化方面TAC、GPX、SOD、MDA和H2O2均未产生显著影响(P＞0.05)。在代谢变化方面，G20、G40、G80组的GLU含量均值均高于G0组，在“试验时间×分组”效应上，饲喂GSPE对血浆GLU产生极显著的影响(P＜0.01)，且G40组的效果优于G20、G80;G40相对于G0组NEFA含量在“试验时间×分组”效应上在生理浓度范围内显著升高(P＜0.05);饲喂GSPE对酮体未产生显著影响(P＞0.05)。结果表明，饲喂GSPE可提高泌乳早期奶牛机体的血浆葡萄糖水平，对于减少泌乳早期奶牛能量负平衡的发生具有积极作用，以40mg/kg BW/day的GSPE效果较好。试验二:葡萄籽原花青素对奶牛乳汁抗氧化能力和酮体含量的影响选择48头泌乳早期奶牛，按完全随机设计分为4组:G0、G20、G40、G80。对照组(G0)饲喂原奶牛场的基础日粮;G20、G40和G80组，分别在基础日粮中添加20、40和80mg/kg BW/day的GSPE。试验期42d，GSPE各剂量组每天上午灌喂一次GSPE溶液，G0组同时灌喂一次同等剂量的牛场饮用水，并于0d（灌喂前），7d，14d，21d，28d，35d，42d常规采集奶样分离乳清，测定TAC、GPX、H2O2及KET指标。结果显示，G0、G20、G40和G80四组奶牛乳清TAC、GPX、H2O2在分组效应上，G40组奶牛的乳清GPX活力极显著的高于G0组(P＜0.01)，且GSPE各剂量组在试验期间乳清GPX活力均高于G0组;乳清TAC、H2O2在GSPE各剂量组与G0组间差异不显著(P＞0.05)，但相对于G0、G20、G80组，G40组的乳清TAC较高，乳清H2O2含量较低。从奶牛乳汁抗氧化状态变化上分析，40mgGSPE/kg BW/day的剂量，在改善奶牛乳汁抗氧化性能方面的效果更好。在代谢变化方面，酮体水平在GSPE各剂量组与G0组间均无显著差异(P＞0.05)。研究表明，在泌乳早期奶牛日粮中添加GSPE对乳汁抗氧化性能方面无负面影响，且40mg/kg BW/day的GSPE可改善乳汁GPX活力。试验三:奶牛血浆与乳清中抗氧化及酮体指标的含量及相关性分析本试验选取南宁市某奶牛场48头泌乳早期健康奶牛，连续采样7周，于每周末清晨空腹采集血样和奶样，并及时制备血浆和乳清，分别获得336份样品。测定TAC、GPX、H2O2、KET水平。结果显示:乳清和血浆的TAC含量分别为6.89±1.96U/mL和4.97±1.99U/mL，GPX分别为38.96±18.23U/mL和122.17±64.43U/mL，H2O2分别为7.78±2.97mmol/L和16.80±5.31mmol/L，KET分别为8.54±2.56mg/dL和3.25±1.48mg/dL，其差异均达极显著水平(P＜0.01)。乳清与血浆GPX呈极显著正相关(r=0.552，P＜0.01)、TAC呈显著正相关(r=0.113，P＜0.05)、H2O2呈显著正相关(r=0.124，P＜0.05)。健康奶牛乳清与血浆KET无显著相关性(r=0.058，P＞0.05)，但乳清KET与血浆TAC显著负相关(r=-0.122，P＜0.05)，与血浆GPX极显著负相关(r=-0.326，P＜0.01)。结果表明，乳清TAC、H2O2、KET可作为评估奶牛机体健康状况的备选指标;乳清GPX可作为奶牛GPX普检中的评价指标。综上所述:日粮中添加GSPE，对酮体水平没有显著影响，可以提高泌乳早期奶牛机体的血浆葡萄糖水平，改善乳汁GPX活力，其中以40mg/kgBW/day的GSPE添加效果较好。检测乳清GPX活力，可作为普查与监控泌乳早期奶牛健康与GPX水平的参考方法。

目录

论文说明

声明

摘要

英文缩略词表

第一章 文献综述

1 葡萄籽原花青素的作用及研究现状

1．1 原花青素

1．2 葡萄籽原花青素的研究现状

1．3 原花青素在畜禽生产应用上的研究进展

2 牛奶的抗氧化性能与人类健康

2．1 牛奶中的抗氧化物质

2．2 牛奶中非酶类抗氧化物质

2．3 牛奶中酶类抗氧化物质

3 氧化应激与奶牛疾病

3．1 氧化应激

3．2 氧化应激与奶牛生理期的关系

3．3 氧化应激与乳房炎

3．4 氧化应激与酮病

3．5 氧化应激与奶牛的饲料成分

4 用牛乳代替血液指示奶牛疾病及健康状况的研究

5 本研究的目的和意义

第二章 葡萄籽原花青素对奶牛血浆抗氧化能力和酮病等指标的影响

1 材料

1．1 GSPE

1．2 试验奶牛

1．3 仪器

1．4 试剂盒、试剂及其个别检测试剂的配制

2 实验方法

2．1 试验设计

2．2 血浆样品的收集与制备

2．3 氧化抗氧化指标

2．4 酮病等指标

2．5 试验数据统计与分析

3 结果与分析

3．1 饲喂GSPE对奶牛血浆氧化抗氧化及酮病等指标的影响

3．2 饲喂GSPE在试验时间上对奶牛血浆氧化抗氧化及酮病等指标的影响

3．3 饲喂GSPE在分组与时间交互作用上对奶牛血浆氧化抗氧化及酮病等指标的影响

4 讨论

4．1 饲喂GSPE对氧化抗氧化指标的影响

4．2 饲喂GSPE对酮病等指标的影响

5 小结

第三章 葡萄籽原花青素对奶牛乳汁抗氧化能力和酮体含量的影响

1 材料

1．1 GSPE

1．2 试验奶牛

1．3 仪器

1．4 试剂

2 实验方法

2．1 试验设计

2．2 奶样的收集与制备

2．3 氧化抗氧化指标

2．4 酮体

2．5 试验数据统计与分析

3 结果与分析

3．1 饲喂GSPE对奶牛乳清氧化抗氧化及酮体指标的影响

3．2 饲喂GSPE在试验时间上对奶牛乳清氧化抗氧化及酮体指标的影响

3．3 饲喂GSPE在分组与时间交互作用上对奶牛乳清氧化抗氧化及酮体指标的影响

4 讨论

4．1 饲喂GSPE对乳汁抗氧化能力及KET的影响

4．2 饲喂GSPE对牛奶中GPX活力的影响

5 小结

第四章 奶牛血浆与乳清中抗氧化及酮体指标的含量及相关性分析

1 材料

1．1 试验动物

1．2 仪器

1．3 试剂

2 方法

2．1 奶样和血样的收集与制备

2．2 氧化抗氧化指标

2．3 酮体

2．4 实验数据统计与分析

3 结果与分析

3．2 奶牛血浆和乳清TAC、GPX、H2O2及KET含量的动态变化规律

3．3 血浆和乳清TAC、GPX、H2O2及KET相关性分析

4 讨论

4．1 乳清指标测定的结果分析

4．2 奶牛乳清和血浆中抗氧化指标的相关性及检测意义

4．3 乳汁KET指标检测的意义

5 小结

全文结论

参考文献

附录

致谢

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