斜带石斑鱼GnRH和GnRH受体的克隆及其mRNA表达特性研究

摘要

本文采用RT-PCR方法和cDNA末端快速扩增技术(RACE)，从斜带石斑鱼(Epinepheluscoioides)下丘脑总RNA中进行扩增，得到斜带石斑鱼sbGnRHcDNA全序列。该cDNA全长408bp，编码区285bp，所编码的前体sbGnRH蛋白为94个氨基酸，包括22个氨基酸的信号肽、sbGnRH成熟十肽、加工位点(Gly-Lys-Arg)和GnRH联合肽(GnRH-associatedpeptide，GAP)。同源性分析表明，斜带石斑鱼sbGuRH与舌齿鲈(Dicentrarchuslabrax)sbGnRH同源性为72.3％，与鲻鱼(Mugilcephalus)sbGnRH同源性为71.7％。进化树分析表明，斜带石斑鱼sbGnRH与鲈形目的狼鲈科(条纹狼鲈和舌齿鲈)、鲷科(金头鲷和真鲷)、石首鱼科(波纹绒须石首鱼和红拟石首鱼)鱼类sbGnRH在同一进化支上的不同分支，与鲷科的金头鲷和真鲷亲缘性最近。采用两步法RT-PCR结合Southernblot分析对sbGnRH在斜带石斑鱼成体各组织、胚胎发育和幼体发育早期的表达情况进行了初步的研究。为了更好地了解GnRH在斜带石斑鱼中的生理功能，我们利用PCR方法从斜带石斑鱼垂体总RNA克隆了GnRH受体(GnRHR)的cDNA全长序列。为了获取GnRHR抗体，通过免疫组织化学方法来检测斜带石斑鱼GnRHR蛋白在体内的表达分布水平情况，将斜带石斑鱼GnRHR的开放读码框(ORF)克隆于表达载体pET-22b。重组表达载体经NdeI和XhoI双酶切鉴定，能得到与PCR产物大小一致的片段及载体pET-22b大小一致的片段，表明重组表达载体gGnRHR-pET-22b已经成功构建。随后的GnRHR原核表达还有待进一步研究。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：缩略词

前 言

第1章斜带石斑鱼sbGnRH全长cDNA的克隆及序列分析

1.材料

2.方法

3.结果

4.讨论

第2章斜带石斑鱼sbGnRH mRNA的表达水平研究

1.材料

2.方法

3.结果

4.讨论

第3章斜带石斑鱼GnRH受体cDNA的克隆及表达载体的构建

第一节斜带石斑鱼GnRH受体cDNA的克隆及序列分析

1 材料

2 方法

3 结果

4 讨论

第二节斜带石斑鱼GnRHR重组表达载体的构建

第四章斜带石斑鱼成体组织GnRHR mRNA的表达水平研究

1.材料与方法

2.结果

3.讨论

参考文献

后记

论文原创性声明