犬半舌同种异体移植的初步研究

摘要

本课题采用Beagle犬进行半舌同种异体移植，探讨早期急性排斥反应的特征和规律，建立观察指标和分级标准。同时，在实验动物长期存活的基础上，初步探讨移植舌运动功能的恢复情况，为今后深入研究各种功能恢复情况及进行全舌移植奠定基础。 研究内容及目的： 1.应用显微外科技术建立Beagle犬半舌异体移植模型，探讨舌同种异体移植的可行性，同时为移植后功能变化研究创造条件。 2.观察急性排斥反应的肉眼、HE及免疫组化特征，探讨其发生规律，在此基础上，建立急性排斥反应观察指标和分级标准，以便用于指导进一步的动物实验及临床研究。 研究材料和方法： 1.半舌同种异体移植动物模型的建立8只购自中山大学实验动物中心Beagle犬，体重10kg左右。选择头面部大小及体重相近、性别匹配的犬分别作为供受体，配成四对。供受体均采用全麻，保持生命体征平稳的状态下进行手术。颈部切口找到颈外动静脉、舌动静脉、舌神经及舌下神经，向上分离至入舌处。再经口内切取右侧半舌。第二组人员同时准备相同的手术，取下后交换犬的右侧半舌，分别缝合于缺损处。然后进行血管神经吻合，最后缝合颈部伤口，放置引流管或引流条。配对犬随机分为两组，一组不用免疫抑制剂(对照组，a组)，另一组使用免疫抑制剂(实验组，b组)。术后观察移植半舌的大体情况，生存状况，对存活3个月动物的舌下神经进行电生理检测。 2.半舌移植急性排斥反应的特征观察利用第一部分建立的动物模型，a组动物进行排斥反应的观察，术后每天数次观察移植半舌的颜色、温度、质地及活动情况。分别于术后1、3、5、7天选取活检标本，HE染色观察。建立排斥反应大体和光镜的观察指标和分级标准，确立排斥反应发生的时间和严重程度。b组动物根据实际情况选取活检标本，观察是否发生排斥反应。 利用上述活检所得标本，10％福尔马林浸泡后制作石蜡切片，免疫组化观察GrB(GranzymeB)在移植舌组织中的表达情况。另一份标本液氮迅速冻存，RT-PCR检测PFP(Perforin)/GrB的表达情况。观察PFP/GrB表达与急性排斥反应的关系。 研究结果： 1.半舌同种异体移植动物模型的建立a组动物均发生了急性排斥反应。b组动物中，Ⅰb号动物在术后11天出现不可逆转的排斥反应，移植半舌最终发生排斥；Ⅱb号动物术后7天发生可以逆转的排斥反应，术后31天因颈部感染而死亡；Ⅲb动物术后6天因感染控制不佳而死亡；Ⅳb号动物术后4天出现可逆转的排斥反应，而后情况稳定，术后第100天进行舌下神经电生理实验，发现神经传导功能部分恢复。 2.半舌移植急性排斥反应的特征观察a组动物术后均发生了排斥反应，大体观察平均7.5天发生完全的排斥反应，镜下观察平均6天发生完全的排斥反应。按分级标准镜下观察平均2.75天发生Ⅰ级排斥反应，4.25天发生Ⅱ级排斥反应。b组动物中，有3只发生急性排斥反应，其中2只经加大环孢素和强的松剂量恢复了正常，另1只恢复不佳移植物最终排斥。 由a组动物可知，GrB可以在排斥反应中表达，而且，在大体观察未发现排斥反应时即可见到其表达，HE病理观察分级为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的标本中有GrB蛋白及PFP/GrB基因表达，但在Ⅳ级时则未见表达。 研究结论： 1.采用非同胞Beagle犬进行半舌同种异体移植是可行的。先使用CSA大剂量冲击再小剂量维持，可以获得较好的抗排斥作用。针对早期的急性排斥反应，及时处理可以恢复正常。 2.参照皮肤及心脏移植急性排斥反应的分级标准，结合本实验大体及病理观察，建立了舌移植急性排斥反应的观察指标和分级标准，可以对急性排斥反应的发生时间和严重程度进行估计。 3.在排斥反应的早期，PFP/GrBcDNA表达程度与急性排斥反应分级存在相关性，可以作为早期发现舌移植排斥的一个重要指标。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：英文缩略词表

前言

第一部分半舌同种异体移植动物模型的建立

第二部分半舌移植急性排斥反应的特征观察

参考文献

附图

附录个人简介

综述口腔颌面部复合组织异体移植研究进展

致谢

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