IL-12恢复化疗药5-氟尿嘧啶（5-FU）抑制的T细胞免疫功能

摘要

目的： 进一步探讨5-FU对正常人外周血T细胞介导免疫应答的抑制机制及IL-12是否能够恢复由5-FU引起的免疫抑制功能，为临床用药和治疗提供理论依据。 实验材料和方法： (1)首先观察5-FU对肝癌细胞株HepG2及正常人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells，PBMCs)增殖和活性的影响，找出既能抑制肿瘤生长，也能抑制免疫细胞功能的5-Fu浓度，以此浓度作为实验的作用浓度。 (2)PBMCs在anti-CD3或anti-CD3+anti-CD28刺激的条件下，加入或不加入不同浓度5-FU共同培养，利用EIASA法检测培养上清中IFN-γ的水平。 (3)PBMCs预先加入或不加入5-FU共同培养后，再分别加入anti-CD3+anti-CD28刺激，利用流式细胞检测技术分析T细胞亚群表达细胞因子IFN-γ和IL-2以及细胞活化分子CD25表达的变化。 (4)PBMCs加入anti-CD3、anti-CD3+5-FU和上述两组分别加入不同浓度的IL-12共培养于96孔平底培养板48 h后收集上清，ELISA法检测IFN-γ。另外，PBMCs与anti-CD3或anti-CD3+5-FU于同样条件下预处理24 h后再分别加入不同浓度IL-12，继续培养，收集上清，ELISA法检测IFN-γ。 (5)Anti-CD3+anti-CD28、IL-12、5-FU不同配伍组合与PBMCs共培养后收集细胞进行细胞表面和细胞内染色。 IL-12恢复化疗药5-氟尿嘧啶(5-FU)抑制的T细胞免疫功能结果： (1)5-FU抑制肝癌细胞株HepG2的生长，同时以剂量依赖方式抑制正常人PBMCs的生长及IFN-γ的产生。当5-FU浓度为10μg/ml或50μg/ml时，既能抑制肿瘤细胞株的生长，也抑制免疫细胞分泌IFN-γ。 (2)T细胞亚群分析的结果表明，5-FU抑制了CD4<'+>和CD8<'+>T淋巴细胞IFN-γ和IL-2的表达，同时也抑制了两种细胞亚群细胞表面活化分子CD25的表达。 (3)5-FU预处理与否，IL-12都能在整体细胞水平上恢复T细胞产生IFN-γ的能力。 (4)IL-12能促进由anti.CD3+anti-CD28诱导的CD4<'+>和CD8<'+>T细胞IFN-γ产生。与anti-CD3+anti.CD28+5-FU组相比，anti-CD3+anti-CD28+5-FU+IL-12组产生IFN-γ的CD4<'+>和CD8<'+>T细胞百分率都升高，说明IL-12能恢复由5-FU抑制后CD4<'+>和CD8<'+>T细胞产生IFN-γ的能力。 结论： 本研究证明了5-FU抑制肿瘤细胞生长的同时也抑制免疫细胞的应答，以剂量依赖方式抑制正常人PBMCs IFN-γ的产生。5-FU抑制CD4<'+>和CD8<'+>T淋巴细胞IFN-γ和IL-2的表达，同时也抑制PBMCs的活化。当将IL-12加入到经anti-CD3和5-FU作用的细胞中后，在整体细胞水平和单个细胞水平上都能恢复T细胞产生IFN-γ的能力。我们的研究表明IL-2能够恢复由5-FU抑制的T细胞免疫功能，为临床的肿瘤免疫治疗提供新的思路。

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小结

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