Apodemus胚胎干细胞和人胚胎干细胞向中胚层分化的研究

摘要

胚胎干细胞是来源于胚胎时期囊胚内细胞团的一种多潜能干细胞，能在体外自我更新，并且可以诱导分化为内胚层、中胚层和外胚层三个胚层来源的细胞，其中中胚层来源的细胞如脂肪细胞、成骨细胞、软骨细胞和肌细胞等是目前细胞替代治疗和组织工程中重要的种子细胞，因而在基础研究和临床治疗中都有很好的应用前景。目前，体外中胚层来源的细胞主要由间质干细胞诱导分化而来，这是因为间质干细胞具有取材方便，分离培养简单，多种分化潜能和免疫调节等优点，但是间质干细胞自身也存在着一些缺点，例如相对低的生产率，大约100，000个细胞中才有1个真正的干细胞；自我更新能力有限，而且随着时间的延长，增殖潜能及向特定细胞分化的能力均消失殆尽。因而，仍需要发展一种新的细胞资源，所以是否能从胚胎干细胞中得到间质干细胞或其他中胚层来源的细胞理所当然的成为人们关注的新目标。所以，为了更好的探讨胚胎干细胞向中胚层分化的问题，本研究利用已有的两种胚胎干细胞一Apodemus和人胚胎干细胞，来分别研究它们向中胚层分化。首先应用Apodemus胚胎干细胞，建立了生成脂肪细胞、成骨细胞、软骨细胞和心肌细胞的体外分化模型，其次利用人胚胎干细胞，建立了一种获得人胚胎干细胞来源的间质干细胞的新方法。 因此本研究分为两个部分： 第一部分为Apodemus胚胎干细胞向中胚层诱导分化的研究。这部分内容主要包括：首先通过利用悬滴和悬浮培养方法，Apodemus胚胎干细胞形成拟胚体，然后通过不同的诱导液，拟胚体分别诱导分化成脂肪细胞、成骨细胞、软骨细胞和心肌细胞，最后这四种分化形成的细胞通过组化染色，细胞免疫染色及RT-PCR来进行鉴定。 第二部分为从分化的人胚胎干细胞中分选间质干细胞的研究。这部分内容主要包括：首先通过悬滴和悬浮培养方法，人胚胎干细胞形成拟胚体，接着拟胚体贴壁分化14天，然后利用C0271磁珠分选，从分化的人胚胎干细胞得到CD271阳性细胞，最后分选得到的阳性细胞进行包括生长周期、细胞核型、成瘤性、表面抗原和多向分化潜能等在内的多种生物特性方面的检测。 结论： 1.分化的人胚胎干细胞经CD271磁珠分选得到阳性细胞。CD271阳性细胞的细胞形态与BMMSCs相似，为长梭形，且能在体外扩增20代左右。 2.该细胞群体倍增时间为25.88小时，比BMMSCs增殖速度稍慢。 3.该细胞在体外培养过程中保持正常的核型并且没有成瘤性。 4.表面抗原分析表明该细胞表达间质干细胞相关的表面分子，而不表达造血细胞的某些特异性表面分子。 5.该细胞在体外能够分化为脂肪细胞和成骨细胞。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：英文缩写词汇表

前言

第一部分Apodemus胚胎干细胞向中胚层诱导分化

1.1材料

1.2方法

1.3结果

1.4讨论

1.5结论

第二部分从分化的人胚胎干细胞中分选出间质干细胞

2.1材料

2.2方法

2.3结果

2.5讨论

2.4结论

全文小结

参考文献

附表

附图

致谢

原创性声明