斑马鱼胰腺形态学观察及siPDX-1对斑马鱼胰岛发育的影响

摘要

目的： 1.建立斑马鱼实验室繁育系统以开展发育生物学研究。 2.观察成年斑马鱼胰腺形态学特征及其胰岛的形态、分布和数量，为胰腺发育及病理学研究提供正常参考值。 3.考察pdx-1与斑马鱼胰岛发育的关系，探讨胰腺发育调控的分子机制，为后续斑马鱼糖尿病模型的建立提供实验室资料。 方法： 1.利用鱼缸(不同规格)、潜水泵及水族用紫外消毒灯、过滤器、给氧泵、控温棒、计时电源插座等常见的养鱼设备组建斑马鱼饲养体系。 2.采用连续切片和镜下解剖技术、HE染色和免疫荧光染色技术、透射电子显微镜技术对斑马鱼胰腺形态学特征进行观察。 3.采用显微注射和原位杂交技术、RT-PCR和siRNA技术、免疫荧光染色技术对经过siRNA处理的斑马鱼胚胎胰腺形态和发育进行静态和动态的观察。 结果： 1.利用组建的斑马鱼繁育系统成功地对斑马鱼进行繁殖和饲养，经条件优化后克服了某些商品化饲料使鱼组织自发荧光的现象，并对斑马鱼胚胎发育进行了动态观察。 2.成年斑马鱼肠道周围的胰腺包括4个分布相对独立和集中的胰腺叶，在其中观察到4类胰岛，即主胰岛、Brockmann体、离散胰岛、单个β细胞；某些胰岛同时含有β和α细胞，而另有些胰岛只含有β细胞；每条鱼胰岛数平均为84.53±43.77，其下四分位数、中位数、上四分位数分别为55.25、70.50、112.00(n=40)；不同胰岛在胰腺4叶当中的分布差异有统计学意义(P<0.05)；在不同的胰岛细胞质中观察到3种内分泌颗粒。 3.RT-PCR结果显示斑马鱼pdx-1基因在受精后的1细胞期即开始表达；原位杂交的结果表明，针对斑马鱼pdx-1mRNA的siRNA(siPDX-1)对受精后48小时、72小时斑马鱼胚胎的胰岛器官形成有干扰作用；免疫荧光染色结果表明，siPDX-1对受精后5天的胚胎胰岛器官形成有干扰作用。 结论： 1.利用普通家用观赏鱼设备可以在实验室组建成本低廉、功能可靠的斑马鱼繁育系统，某些商品化饲料由于含有生物发光成分不适用于实验室斑马鱼的饲养。 2.根据成年斑马鱼胰腺的分布、集中程度以及所包含的胰岛成分的不同，可将成年斑马鱼胰腺分为4叶，分别命名为胆脾叶、中间叶、左侧叶和腹侧叶。 3.斑马鱼卵细胞受精后即启动pdx-1的表达，在1细胞期注射siPDX-1干扰了斑马鱼胚胎胰岛器官形态的正常形成。

目录

文摘

英文文摘

第1章pdx-1与胰腺

1.1胰腺发育生物学研究的意义

1.2胰腺的形态发生

1.3胰腺发育的分子调控机制

1.4pdx-1基因与PDX-1蛋白

1.5pdx-1的表达与调控

1.6pdx-1与胰腺发育和胰腺功能

1.7pdx-1与糖尿病

1.8斑马鱼

1.9斑马鱼胰腺发育生物学研究

1.10pdx-1与斑马鱼胰腺

1.11立题依据和研究意义

第2章RNAi机制概述

2.1RNAi的发现

2.2RNAi的机制

2.3与RNAi相关的重要分子

2.4micro-RNA

2.5RNAi的应用前景及存在问题

第3章斑马鱼实验室繁育系统的建立

3.1材料与方法

3.2结果

3.3讨论

第4章成年斑马鱼胰腺解剖学和组织学观察

4.1材料与方法

4.2结果

4.3讨论

第5章siPDX-1对斑马鱼胰岛发育的影响

5.1材料与方法

5.2结果

5.3讨论

参考文献

英语缩略语词表

附录一：与本课题相关的已发表及拟发表论文

附录二：原创声明

附录三：致谢