三氯乙烯药疹样皮炎患者CXCR2基因表达水平研究

摘要

职业性三氯乙烯药疹样皮炎是一种发病较为迅猛的职业病。多为接触三氯乙烯一段时间后发病，临床表现一般为先发热，后出皮疹，并伴随有一定的肝、肾损伤，重症患者甚至出现肝、肾等器官的功能衰竭。每年都有相当数量的新接触该行业的工人发病，给经济发展和社会稳定带来了不利因素。 现阶段，国内外对该疾病的研究还处在临床经验、血清学和细胞形态学阶段，分子生物学研究也刚刚起步，对该疾病的发病机制和机理尚未明确。现阶段认为是一种变态性的炎症反应，在分子方面可以从研究趋化因子受体基因的表达水平入手，对该疾病的发病机制进行进一步的研究和探讨，为从根本上预防和治疗这种职业病提供理论依据，同时也为职业病研究领域提供新的方法和思路。 本研究的内容之一是皮炎类疾病微量血样取样方法的建立。以前对皮炎患者的采样主要以取表皮和真皮组织为主，一方面对患者身心造成了损伤，使他们对采样产生抵触情绪，增加了取样难度。另一方面，组织采样的操作流程繁琐，样本不易保存，研磨后RNA降解严重，不利于下步反转录操作的进行。本研究选取血液作为新的皮炎患者的样本，探讨从1ml新鲜血液中一步提取RNA的实验方法，并对RNA结果进行检测和RT-PCR。实验证明可以用血液代替组织在皮炎疾病方面进行分子水平检测，同时降低了患者采样的难度。因而能最大程度的扩大取样范围，也为皮炎类疾病分子生物学研究建`立了新的方法。内容之二是通过对职业性三氯乙烯药疹样皮炎患者外周血趋化因子受体基因(CXCR2)表达水平的研究，对该疾病的发病机制进行进一步的探讨。通过半定量即RT-PCR的实验方法对患者、接触者和正常对照组的CXCR2基因表达水平进行检测，并分组对病例-对照组和接触-对照组进行对照分析。 病例-对照组分析结果表明：CXCR2基因在两组中的表达水平存在明显差异，t=3.92，P=0.001<0.05，可以认为病例和对照组中，该基因的表达水平具有统计学意义。从以上结果可以得出，在三氯乙烯药疹样皮炎患者外周血中，趋化因子受体基因的表达是明显上调的，其表达水平是正常人群的2.345倍。这也说明，该基因在疾病的发病过程中起了非常重要的作用，通过异常趋化炎症细胞到表皮发生反应，进而导致了机体损伤和疾病的发生。 接触-对照组分析结果表明：CXCR2基因在接触中的表达水平与正常人群相比显著降低，t=0.419，P=0.001<0.05，说明接触组和对照组的基因表达水平具有统计学意义。结果提示：CXCR2在接触三氯乙烯但不发病的人群中低表达，可能使其趋化因子IL-8的信号传递通路受阻，产生了疾病的易感性差异。 但是现阶段对于该疾病的病理还不十分明确，到底是何种物质启动趋化因子受体基因表达还需进行进一步的研究。同时，鉴于该职业病的病例较少，也需加大样本量使研究结果更为准确。作为迟发性变态发应，可以考虑从免疫系统调控方面进行下一步研究，找出在该疾病发生过程中特异性表达的基因组群作为生物标记，以便对该疾病的发病机制作出更深入的了解。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：缩略词表

第1章引言

1.1国内外职业卫生现状

1.2职业性三氯乙烯药疹样皮炎的临床治疗

1.3国内外三氯乙烯药疹样皮炎的生物学研究进展

1.4趋化因子受体基因

1.5本研究的主要内容和意义

第2章实验原理和方法

2.1样本采集方法的选取

2.2半定量PCR研究基因表达水平的方法

2.3定量对照的选取

2.4微量血中淋巴细胞的原代培养方法

2.5外周血中微量RNA的提取方法

第3章职业性三氯乙烯药疹样皮炎CXCR2基因表达水平研究

3.1前言

3.2材料、试剂和仪器

3.3 CXCR2基因表达水平研究

3.4结果

3.5分析和讨论

第4章展望

4.1当前需要解决的问题

4.2分子生物学领域的研究内容

参考文献

附录

附录1参加科研项目、发表文章及参加学术会议情况

附录2中华人民共和国职业病防治法

致谢

原创性声明