北欧蓝莓提取物对体外培养人角膜缘上皮细胞作用的初步研究

摘要

目的： 北欧蓝莓作为一种有益于人视力的食物或者保健品，在全世界已有很长时间广泛应用。但是，目前无论是临床试验还是基础研究，在北欧蓝莓在应用于眼表疾病方面仍缺乏系统的科学依据。本文研究不同浓度北欧蓝莓提取物(简称北欧蓝莓素)对体外培养的人角膜缘上皮细胞增殖、细胞周期及分泌功能的影响，从而为进一步揭示北欧蓝莓素在眼表疾病如干眼症治疗及恢复中的潜在应用价值提供实验依据。 方法： 1、北欧蓝莓提取物的溶解、除菌与稀释。 2、体外培养人角膜缘上皮细胞(人角膜缘上皮细胞系SDHCEC1由中山眼科中心王智崇教授惠赠)，选择P22-25代细胞用于以下实验。将不同浓度(100，10，1，0.1，0.01，0.001μM)北欧蓝莓素加入细胞培养液中，于药物作用后24小时、48小时分别检测以下指标： (1)通过3-(4，5-二甲基噻唑—2)—2，5-=苯基四氮唑溴盐比色法(MTT法)检测对细胞增殖的影响； (2)流式细胞仪测定细胞周期及处于不同细胞周期细胞亚群的比例； (3)酶联免疫吸附测定技术(ELISA法)检测细胞分泌的透明质酸(HA)的变化； (4)酶联免疫吸附测定技术(ELISA法)检测细胞分泌的氨基葡聚糖(GAGs)的变化。 结果： 1、北欧蓝莓提取物在10mg/mL浓度下完全溶解于PBS，在各浓度下(1000，100，10，1，0.1，0.0μM)基本呈无色透明状态； 2、体外传代培养人角膜缘上皮细胞，细胞生长状态良好，光学倒置显微镜下细胞形态与文献报道一致。 3、MTT法检测：10μM浓度的北欧蓝莓素培养24小时后，HCEC增殖程度明显，与对照组相比，差别具有统计学意义，P<0.05；1μM，10μM，100μM北欧蓝莓素培养48小时后，HCEC增殖程度明显，与对照组相比，差别具有统计学意义，P<0.05； 4、北欧蓝莓素培养48小时后，各浓度组流式细胞仪均未检测出凋亡细胞，且发现在100μM北欧蓝莓素作用组，处于S期、G2/M期的细胞比例明显增加，G0/G1期细胞比例减少； 5、北欧蓝莓素培养48小时后，各浓度组HCEC细胞中，HA分泌量与对照组相比增加不明显，差别无统计学意义，P>0.05； 6、0.1μM、100μM北欧蓝莓素培养48小时后，HCEC分泌GAGs明显增加，差别具有统计学意义，P<0.05。 结论：北欧蓝莓素对体外培养的人角膜缘上皮细胞无明显细胞毒性及促凋亡作用；一定浓度的北欧蓝莓素作用下，可以促进体外培养的人角膜缘上皮细胞增殖，且可促进上皮细胞的分泌功能。提示北欧蓝莓素可能对角膜上皮细胞的修复与在再皮化，以及加速眼表泪液膜的形成及修复，保护和提高视力可能具有潜在的积极作用。

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引 言

实验材料和方法

结 果

讨 论

全文结论

问题与展望

参考文献

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致 谢