1、PPAR-γ抑制剂T0070907对鼻咽癌细胞生长的影响;2、2006-2007年中山大学肿瘤医院医院感染调查

摘要

研究背景及目的： 鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma，NPC)是我国常见的头颈部肿瘤，在南方尤其广东地区高发。其中95％以上鼻咽癌患者为低分纯鳞癌和未分化癌，恶性程度高，生长快，易发生转移，75％确诊时已属于晚期，单一放疗对于晚期患者疗效欠佳，目前化疗成为晚期鼻咽癌治疗的主要手段之一，但现有化疗疗效不尽人意，分子靶向药物的发展为NPC的治疗带来新的机遇，寻找新的治疗靶点成为目前研究的热点。 过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisorne proliferator—activated receptor—γ，PPAR—γ)属于细胞核受体超家族成员，与配体结合才能被活化，激活后与视黄酸X受体(retinoid X receptor．RXR)结合形成异二聚体，该异二聚体与靶基因启动子的应答元件(peroxisome proliferator response elements，PPREs)结合，同时招募共刺激因子调节靶基因的转录，从而在脂肪形成、脂质代谢、维持血糖稳定及调节炎症反应等生物学效应中发挥重要作用。近年来，PPAR—γ在肿瘤发生发展中的作用成为大家研究的热点。业已证实PPAR—γ在多种恶性肿瘤组织中均有表达，如肺癌、胃癌、结肠癌、前列腺癌及乳腺癌等。许多研究表明通过抑制肿瘤细胞PPAR—γ的表达能够抑制诸如肝癌、食管癌、胃癌等肿瘤细胞的生长，并诱导凋亡、引起细胞周期阻滞、降低肿瘤细胞粘附及迁徙能力，提示PPAR—γ可以作为一种新的治疗肿瘢的分子靶点之一。T0070907作为一种新型合成的PPAR—γ抑制剂，对PPAR—γ具有较强的亲和力和较高的选择性，通过影响PPAR—γ配体结合域第12螺旋的构象调节PPAR—γ和共刺激因子的相互作用而抑制其活化。有关PPAR—γ在鼻咽癌中的研究却鲜有报道，本实验主要通过研究PPAR—γ抑制剂T0070907对人鼻咽癌细胞的作用及其可能机制，探索其作为新的鼻咽癌治疗的分子靶向药物的可能性。 研究方法： 采用RT—PCR(reverse transcriptase—polymerase chain reaction，RT—PCR)和蛋白印迹法(Western blot)方法检测PPAR—γ在正常鼻咽上皮(NP69)和NPC细胞株(CNE1，CNE2，HONE1，SUNE1，5-8F)中mRNA和蛋白水平的表达；3-(4，5-二甲基—2-噻唑)—2，5-二苯基溴化四唑(MTT)法检测T0070907对NPC细胞生长情况的影响；流式细胞术检测T0070907对鼻咽癌细胞的细胞周期和细胞凋亡的影响；Westernblot检测T0070907对NPC细胞的细胞周期相关蛋白表达的影响作用。 研究结果： 1.PPAR—γ在鼻咽癌细胞株中的表达情况RT—PCR和Westernblot方法检测结果显示，PPAR—γ在正常鼻咽上皮细胞(NP69)和5株鼻咽癌细胞(CNE1，CNE2，HONE1，SUNE1，5-8F)中均有表达。且PPAR—γ在NP69中的表达明显低于鼻咽癌细胞株中的表达，在高分化细胞株CNE1中的表达低于低分化细胞株CNE2中的表达。 2.T0070907对CNE1、CNE2细胞PPAR—γ蛋白表达的影响Westernblot方法检测结果显示，用6.25、12.5、25μmol/L的T0070907处理后，CNE1、CNE2细胞中PPAR—γ蛋白的表达下降，且随着浓度的升高下降越明显。 3.T0870907对鼻咽癌细胞增殖的影响MTT法结果显示不同浓度的T0070907对5株鼻咽癌细胞均有增殖抑制作用，且随着浓度的增加，抑制作用越显著。其中T0070907对CNE1，CNE2，HONE1，SUNE1，5-8F各细胞的IC50(the50％inhibitoryconcentrationIC50)值分别为12.61±0.48μmol/L、14.40±0.71μmol/L、20.5+0.35μmol/L、26.93±1.03μmol/L、19.23±1.31μmol/L。由于T0070907对CNE1、CNE2的抑制作用比较明显，故在不同时间点对CNE1、CNE2进行了检测，结果显示，随着作用时间的延长，T0070907对其的抑制作用越明显，呈现浓度和时间依赖性。 结论： 1.PPAR—γ在鼻咽癌细胞中有表达； 2.PPAR—γ抑制剂T0070907能够抑制鼻咽癌细胞增殖； 3.PPAR—γ抑制剂T0070907使鼻咽癌细胞CNE1，CNE2细胞周期阻滞在G2/M期，但并不能引起细胞凋亡； 4.PPAR—γ抑制剂T0070907引起的细胞周期G2/M期阻滞，可能通过对细胞周期相关蛋白CyclinA、CyclinB1、Cdc2、pCdc2及Cdk2等蛋白的调控实现。 研究背景及目的： 医院感染已经成为一个全球关注的问题。2006年一项4国家的医院感染调查显示，英国的感染率为8.2％，威尔士为6.4％，北爱尔兰为5.4％，爱尔兰共和国为4.9％。据全国医院感染监控系统的报告显示，我国1987年医院感染的现患率为9.7％，2001年为5.2％，2003年为4.8％，2005年为4.8％。说明经过多年努力，我国医院感染的控制已经取得一定成绩。然而肿瘤患者这个特殊人群的院感发生情况还缺乏大规模的调查。随着肿瘤发病率的增加，该群体人数逐渐增多，肿瘤患者总体患病年龄偏高，且本身免疫力下降，加上化疗、放疗和手术等治疗带来的毒副作用，极易发生医院感染，故肿瘤患者的医院感染问题应引起足够的重视。虽然缺乏大规模的肿瘤患者院感现患率的调查，各医院肿瘤患者院感发生率波动较大，但从一些散在报道来看，其感染率较综合医院平均水平高。本文中我们主要对中山大学肿瘤医院2006年1月至2007年12月期间发生医院感染的情况、病原菌菌谱分析和耐药性检测的报告进行调查和分析，以提高我们对肿瘤患者院感状况的认识和了解，为感染的预防和治疗提供参考。 资料来源与方法：： 收集2006年1月至2007年12月各科室上报的在中山大学肿瘤医院住院治疗并发生医院感染的952例肿瘤患者病历资料，进行回顾性调查，采用EXCEL8.0建立数据库对医院感染一般情况、病原菌分布及耐药情况进行统计，SPSS10.0软件对相应数据进行分析。同时，查阅抗生素使用情况调查表，了解抗生素的使用情况、联合使用情况和抗生素的种类。 结果： 1、医院感染发生的一般情况2006年1月至2007年12月期间我院住院患者共50011例，其中发生医院感染共952例。医院感染患者的感染率为1.9％，发生感染1059例次，例次感染率为2.1％。两年间共漏报28例次，平均漏报率为2.9％。感染患者的年龄为2～87岁，中位年龄为47岁；男性656例，女性296例；从住院到发生医院感染的时间为3～229d，中位时间为26.3d。 2、感染易感因素发生医院感染的肿瘤患者中，由于癌症本身因素所致的感染率为1.5％，占医院感染各因素的31.7％；化疗所引起的患者的感染率为1.2％，占各因素的25.7％；放疗相关的感染发生率为3.4‰，占各因素的7.4％；除此之外，手术和侵入性操作所致的感染率分别为2.7‰、2.5‰，占5.9％、5.3％。 3、感染部位 本调查显示，感染发生部位以呼吸系统为主，占感染的43.7％，其次是腹部和消化系统，占19.1％，口腔感染占13.2％。 4、科室感染率各科室的感染情况来看，ICU的感染率最高，达21.4％，其次为综合科、鼻咽科，分别为4.84％、4.69％。从医院感染构成比来看，内科居首位，占53.36％，其次为放疗科，占10.19％，再为鼻咽科和综合科，分别占7.67％、7.35％，而ICU仅占0.32％。 5、感染病原菌的分布952例发生医院感染的患者中，分离出了病原菌794例，检出率为83.4％。其中检出革兰阴性球菌321例，占所有病原菌的40.4％，主要是大肠埃希氏菌的感染；真菌265例，占33.4％，以白色假丝酵母菌感染为主；革兰阳性球菌208例，占26.2％，主要是葡萄球菌属和链球菌属感染。 6、医院抗生素的使用情况我院抗生素使用率达到74.8％。使用单药的占51.1％；二联占39.2％；三联及以上占9.7％。其中，头孢类的抗生素使用率最高，达到44.7％；喹诺酮类占23.0％；其他种类的抗生素则均在10％以下。 7、各病原菌对抗生素的耐药情况药敏结果提示革兰阴性杆菌主要对亚胺培南、丁胺卡那霉素敏感，而对氨苄西林的耐药率则在90％以上：革兰阳性球菌对万古霉素高度敏感，此次调查中没有发现对万古霉素耐药细菌，而对氨苄西林耐药严重；真菌对两性霉素B、伏立康唑及氟胞嘧啶敏感，而对氟康唑的敏感性稍差。 结论： 由于肿瘤患者本身的特殊性，易发生医院感染，在治疗癌症的同时应注意毒副作用的对症支持治疗；注重患者的营养和必要的隔离保护，着重对呼吸道、胃肠道和口腔感染的预防和控制；各科室应根据本身的特点有侧重点的预防感染的发生；严格执行无菌操作及消毒隔离制度，及时做病原菌检测，针对病原菌的分布和耐药情况，尽早对发生医院感染的癌症患者进行药敏试验，有针对性的选择抗生素，减少耐药的发生和真菌的感染，才能有效地预防和控制感染。

目录

文摘

英文文摘

论文说明:英文缩略词

声明

第一部分 PPAR-γ抑制剂T0070907对鼻咽癌细胞生长的影响

第一章前言

第二章材料与方法

第三章实验结果

3.1 PPAR-γ在5株鼻咽癌细胞中基因和蛋白水平均有表达

3.2 T0070907能够使鼻咽癌细胞PPAR-γ蛋白表达下降

3.3 T0070907对鼻咽癌细胞增殖的影响

3.3.4 T0070907对鼻咽癌细胞周期的影响

3.5 T0070907对鼻咽癌细胞的细胞凋亡情况的影响

3.6 T0070907对鼻咽癌细胞周期相关蛋白表达的影响

第四章讨论

参考文献

结果附图

第二部分 2006-2007年中山大学肿瘤医院医院感染调查

第一章前言

第二章材料与方法

第三章结果

1、医院感染发生的一般情况

2、感染易感因素

3、感染部位分布情况

4、各科室感染率

5、感染病原菌的分布

6、医院抗生素的使用情况

7、各病原菌对抗生素的耐药情况

第四章讨论

参考文献

附录 硕士期间发表论文情况

致谢