膀胱脱细胞基质负载兔脂肪间充质干细胞构建组织工程膀胱的实验研究

摘要

第一部分：种子细胞—兔脂肪间充质干细胞的培养和鉴定
　　 [目的]本部分从新西兰兔腹股沟脂肪组织中分离得到脂肪间充质干细胞(ADSCs)，并对其进行体外培养、扩增及鉴定，探讨用ADSCs构建组织工程膀胱的可行性。同时也探讨了脂肪间充质干细胞分化成尿路上皮细胞的可行性。
　　 [方法]用胶原酶消化法从兔的腹股沟脂肪中分离得到脂肪间充质干细胞，观察其生物学行为，成脂、成骨诱导后，用油红O及von Kossa、茜素红染色定性等手段进行鉴定。用脂肪间充质干细胞与尿路上皮直接共培养的方法诱导脂肪间充质干细胞分化成尿路上皮细胞。
　　 [结果]用胶原酶消化法能分离得到脂肪间充质干细胞，光镜检查符合脂肪间充质干细胞形态，生长曲线测定提示细胞生长状况良好、具有较强增殖能力。油红O及von Kossa、茜素红染色均阳性。脂肪间充质干细胞经诱导后有尿路上皮样细胞特异性标记。
　　 [结论]用胶原酶消化法从兔的腹股沟脂肪中分离得到的种子细胞，经鉴定证实为脂肪间充质干细胞。该细胞来源广泛、取材容易，创伤小，获取的细胞数量多，培养条件要求低，扩增能力强，是比较理想的组织工程种子细胞。同时也证明脂肪间充质干细胞有分化成尿路上皮细胞的潜能。
　　 第二部分：猪膀胱脱细胞基质支架材料的制备
　　 [目的]探讨猪膀胱脱细胞基质(BAMG)制备的方法及其作为生物支架材料应用于组织工程膀胱构建的可行性。
　　 [方法]综合了搅拌、反复冻融、渗透溶液、生物酶消化等方法，制备脱细胞的膀胱粘膜下基质。用HE染色检查有无细胞成分残留。
　　 [结果]经脱细胞处理所得膀胱粘膜下基质呈白色半透明状，表面光滑，厚度约0.2cm，具有一定弹性及韧性。光镜观查无细胞成分残留。
　　 [结论]综合采用物理和化学方法，制备的膀胱脱细胞基质，组织相容性好，符合组织工程膀胱支架材料的要求。表明脱细胞膀胱粘膜下基质是一种较为理想的膀胱组织修复替代材料。
　　 第三部分：组织工程膀胱的体外构建及兔膀胱替代实验
　　 [目的]通过采用脂肪间充质干细胞和猪膀胱脱细胞基质构建组织工程膀胱的实验研究，探讨应用组织工程膀胱进行膀胱替代修复的可行性。
　　 [方法]以新西兰兔自体ADSCs为种子细胞，以猪的BAMG为支架材料，将ADSCs静态接种于BAMG表面，体外构建组织工程膀胱。新西兰兔27只等分三组，均行膀胱部分切除术，A组用BAMG进行替代修补，B组用复合ADSCs种子细胞的BAMG进行替代修补，C组不作任何修补直接缝合，4、8、12周后取材观察组织工程膀胱的再生情况。
　　 [结果]术后A组修补区明显挛缩，B组修补区无明显挛缩。A组膀胱内均有结石形成，B组及C组膀胱内无结石形成。A、B两组膀胱体积随时间推移逐渐增加，至12周达40 ml左右，约为正常膀胱的80％左右，C组膀胱容量明显缩小。修补区病理组织学检查：4周时A组支架材料部分降解，修补区有大量弥漫炎细胞浸润，主要是淋巴细胞。粘膜面未见移行上皮生长，粘膜下层有少量肌纤维形成；B组支架材料大部分降解，粘膜面可见多层移行上皮生长，粘膜下层可见大量肌纤维形成及新生的毛细血管长入。8周时A组支架材料大部分降解，浸润的炎细胞明显减少。粘膜面可见1到2层移行上皮生长，粘膜下层可见大量胶原及少量肌纤维；B组支架材料基本降解，粘膜面可见多层移行上皮生长，粘膜下层可见大量肌纤维及少量肌束形成，新生的毛细血管数量增多，管腔增大。12周时A组B组支架材料完全降解吸收，A组修补区粘膜面可见1到2层移行上皮生长，粘膜下层可见大量的胶原和肌纤维；B组修补区粘膜面可见5到7层移行上皮生长，粘膜下层可见大量肌束，但排列欠规则。修补区大体上与正常膀胱组织结构相似。
　　 [结论]用新西兰兔自体ADSCs为种子细胞，以猪的BAMG为支架材料，将ADSCs静态接种于BAMG表面，成功的构建组织工程膀胱。所构建的组织工程膀胱进行兔膀胱替代实验，12周后支架材料完全吸收，替代组织基本接近正常膀胱组织。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：英文缩写

声明

引言

第一部分 种子细胞—兔脂肪间充质干细胞的培养和鉴定

材料与方法

结果

讨论

结论

第二部分 猪膀胱脱细胞基质支架材料的制备

材料与方法

结果

讨论

结论

第三部分 组织工程膀胱的体外构建及兔膀胱替代实验

材料与方法

结果

讨论

结论

参考文献

文献综述：组织工程膀胱研究进展

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