高同型半胱氨酸血症促进大鼠腹主动脉球囊损伤后再狭窄过程中尾加压素II及其受体的表达

摘要

背景与目的：经皮冠状动脉腔内成形术(percutaneous transcoronary angioplasty,PTCA)和支架置入术是国内外广泛应用的冠心病介入治疗手段,但术后发生慢性再狭窄是其治疗失败的重要原因。研究表明,高同型半胱氨酸血症(Hyperhomocysteinemia,HH)对大鼠腹主动脉球囊损伤后内膜增生有明显促进作用。作为一种新发现的血管活性肽尾加压素II(urotensin II,UII),在促进动脉损伤术后内膜增生过程中的作用尚未清楚。本实验通过检测HH大鼠腹主动脉球囊损伤术后增生内膜中的UII及其受体(urotensin II recptor,UT,或称GPR14)的表达,来了解UII/GPR14系统在HH促进损伤动脉内膜增生过程中所起的作用。
　　材料和方法：200g Sprague Dawley雄性大鼠40只,随机分为4组:假手术组(C组),高蛋氨酸组(M组),腹主动脉球囊损伤组(I组),腹主动脉球囊损伤+高蛋氨酸组(MI组)。所有动物预饲养一周后,C组、I组予以正常饮食,M组、MI组给予L-蛋氨酸(1g/kg/d)灌胃。4周后利用球囊导管经左颈动脉至腹主动脉行血管内膜损伤。C组、M组单纯予以分离左颈动脉并结扎,不作腹主动脉内膜球囊损伤,I组、MI组均予以腹动脉球囊损伤。腹主动脉球囊损伤模型制作成功后,C组、I组继续予以正常饮食,M组、MI组仍予以L-蛋氨酸(1g/kg/d)灌胃,2周后处死所有实验组动物,利用酶联免疫吸附法和放射免疫学方法分别检测各组大鼠血浆中同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)和UII的含量,HE染色方法观察各组大鼠腹主动脉内膜形态学变化,免疫组织化学方法检测各组大鼠腹主动脉内膜 UII、GPR14表达情况以及逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测各组大鼠腹主动脉GPR14mRNA表达。计量资料采用均数±标准差( x± s)表示,两组间均数比较用T检验,多组间均数比较用单因素方差分析,P<0.05为差异有统计学意义。
　　结果：L-蛋氨酸负荷灌胃形成HH,MI组、M组血浆Hcy含量均明显高于C组、I组;I组、MI组大鼠腹主动脉球囊损伤后14天可见新生内膜明显增厚,其中MI组较I组明显(P<0.01),而 C组、M组未见内膜增生;免疫组织化学方法分别检测腹主动脉内膜 UII及GPR14蛋白表达,其中UII在C组、M组内膜少有表达,在MI组与I组则可见呈强阳性表达,且MI组明显高于I组(P<0.01);而GPR14在四组血管平滑肌及内膜中均有表达,其中MI组增生内膜表达较I组更明显(P<0.01);利用RT-PCR方法可见各组大鼠腹主动脉均有GPR14 mRNA的表达,MI、I组较C组、M组明显(P<0.01), MI组与I组间的差异也有统计学意义(P<0.05);而放射免疫学方法测定各组大鼠血浆UII的水平间差异没有统计学意义(P>0.05)。
　　结论：HH能够加重动脉球囊损伤大鼠内膜增生程度,并促进增生内膜 UII及其受体GPR14蛋白及基因表达的增加,提示UII及其受体可能在HH促进损伤血管内膜增生过程中发挥重要作用。

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第1章 前言

第2章 实验设计

第3章 材料与方法

3.1 实验材料

3.1.1 实验药物、试剂及器材

3.1.2主要仪器设备

3.1.3 实验动物

3.2 实验方法

3.2.1 溶液的配制

3.2.2波片处理

3.2.3 动物与标本处理

3.2.4 ELISA法测定血浆Hcy含量

3.2.5.HE染色形态学观察

3.2.6 UII、GPR14免疫组化染色及测量方法

3.2.7腹主动脉总RNA提取

3.2.8 半定量逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）

3.2.9放射免疫学测定血浆UII含量

第4章 实验结果

4.1结果

4.1.1 实验动物数量分析

4.1.2 各实验组血浆Hcy含量

4.1.3各实验组腹主动脉HE染色形态学观察

4.1.4 HH对大鼠腹主动脉损伤后新内膜增生的影响

4.1.5 UII、GPR14在动脉组织的表达情况

4.1.6 HH对球囊损伤后腹主动脉新内膜UII表达的影响

4.1.7 HH对球囊损伤后腹主动脉新内膜GPR14表达的影响

4.1.8 HH对大鼠腹主动脉损伤后14天各组血管GPR14 mRNA表达的影响

4.1.9 各组大鼠血浆UII含量

4.2附图：

第5章讨论

第6章 结论

参考文献

致谢

综述

个人简历