食管癌患者外周血术前、术后CEAmRNA、CK19mRNA表达及其临床意义

摘要

目的：
　　 （1）探索应用RT-PCR技术联合检测食管癌患者外周血中CEAmRNA、CK19mRNA表达的特异性和敏感性。
　　 （2）探讨外周血中CEAmRNA、CK19mRNA 表达与临床病理资料之间的关系，收集随访资料，评价联合检测外周血中CEAmRNA、CK19mRNA 表达在预测食管癌预后中的价值。
　　 材料和方法：
　　 （1）将人食管癌细胞株Ec-109与已知浓度正常人外周血单核细胞混合，调整为不同数量级浓度，分别行CEAmRNA、CK19mRNA的RT-PCR 反应，以检测RT-PCR 方法的敏感性，并作为阳性对照。
　　 （2）收集汕头大学医学院附属肿瘤医院2009年2 月到2009年5 月食管癌手术患者57例，术前一天抽取新鲜外周血（肝素抗凝）10ml，术后第一天采用同样方法抽血10ml，用人淋巴细胞分离液提取单核细胞层，再应用RT-PCR 方法检测其中CEAmRNA、CK19mRNA的表达。用同样方法检测18例健康人、肺或食管良性病患者外周血CEAmRNA、CK19mRNA作为阴性对照。
　　 （3）收集数据及随访资料，进行统计学分析，评价联合检测外周血CEAmRNA、CK19mRNA表达与临床因素及食管癌患者预后的关系。
　　 结果：
　　 RT-PCR检测食管癌患者外周血CEAmRNA、CK19mRNA 敏感性均为106个正常外周血细胞中可检测出一个表达CEAmRNA、CK19mRNA的癌细胞。18例捐献者外周血中CEAmRNA、CK19mRNA 均阴性。
　　 单基因检测结果与临床病理资料的相关性57例食管癌患者外周血中，术前组31例CEAmRNA阳性，阳性率为54.4%，17例CK19mRNA阳性，阳性率为29.8%；术后组6例CEAmRNA阳性，阳性率为10.5%，2例CK19mRNA阳性，阳性率为3.5%。术前食管癌患者外周血CEAmRNA、CK19mRNA阳性表达均与肿瘤浸润深度（pT）、淋巴结转移情况（pN）及病理分期（pTNM分期）有关(P<0．05 及P<0.01)。术后组食管癌患者外周血CEAmRNA、CK19mRNA阳性表达均与肿瘤浸润深度（pT）有关(P<0.05及P<0.01)。患者的年龄、性别、肿瘤的部位、长度、细胞分化与单基因检测结果均无相关性。
　　 多基因检测结果与临床病理资料的相关性本研究中，同时检测CEAmRNA、CK19mRNA 两基因时，至少1个基因检测结果为阳性(CK19/CEA)，术前组表达率为61.4%(35/57)，与肿瘤的浸润深度、TNM分期具有相关性(P<0.01)；术后组表达率为12.3%(7/57)，与肿瘤的浸润深度具有相关性(P<0.01)。术前13例两基因均阳性表达(22.8%)者为晚期肿瘤患者，统计结果表明其与肿瘤的浸润深度、淋巴结转移、TNM分期具有相关性(P<0.05)；术后1例两基因均阳性表达(1.8%)者为pT4N1M0患者，统计结果表明其与肿瘤的浸润深度具有相关性(P<0.01)；患者的年龄、性别、肿瘤的部位、长度、细胞分化与多基因检测结果均无相关性。统计结果还表明术前组CEAmRNA、CK19mRNA 两基因表达间有正相关(P<0.05)。
　　 随访结果
　　 57例食管癌患者均随访到2010年5 月，失访4例，死亡7例，随访率93.0%，7例死亡患者中位生存期8个月，57例患者中位随访时间13个月，1年生存率87.7%。外周血CEAmRNA阳性病人死亡术前组4例（4/7，57.1%），术后组1例（1/7，14.3%）；外周血CK19mRNA阳性病人死亡术前组2例（2/7，28.6%），术后组1例（1/7，14.3%）。术前二者均阳性患者死亡2例（2/7，28.6%）。术前、术后两指标均阴性患者死亡3例（3/7，42.9%）。
　　 单因素分析术前、术后CEAmRNA、CK19mRNA 表达对患者预后的影响，结果无明显统计学意义。
　　 采用logistic 回归分析食管癌患者各临床因素及外周血CEAmRNA、CK19mRNA 表达对患者预后的影响，结果显示：淋巴结转移与否是患者预后的危险因素，p值为0.001；其余临床因素对食管癌预后无明显影响，结果无统计学意义。
　　 对多个变量指标分别采用Kaplan-Meier分析及Log-rank 时序检验，结果显示:无淋巴结转移食管癌患者术后生存率高于有淋巴结转移者,其差异有显著性(P<0.01)；其它临床因素对生存率的影响不明显，差别无统计学意义(P>0.05)。
　　 结论：
　　 RT-PCR 法联合检测食管癌患者外周血CEAmRNA、CK19mRNA 表达具有较高敏感性和特异性，可作为检测食管癌外周血微转移的一种有效的方法。食管癌患者外周血CEAmRNA、CK19mRNA 表达与肿瘤浸润深度（pT）、淋巴结转移情况（pN）及病理分期（pTNM分期）有关，与患者近期生存率无明显相关。手术切除肿瘤后，患者外周血CEAmRNA、CK19mRNA阳性率明显下降，具体机制有待进一步研究。

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