复方中草药对锯缘青蟹和草鱼免疫作用

摘要

中草药饲料添加剂以其天然低毒、高效绿色的特色在饲料行业中占据着重要的地位。本文以黄芪(RadixAstragali)、黄芩(Radixscutellariae)、杜仲(Eucommiaulmoides)、甘草(Glycyrrhizauralensis)及其复方对7种水产动物常见的病原菌进行体外抑菌活性的考察，从中筛选出抑菌活性较好的配方，然后以该配方制成中草药提取液注射或者浸泡锯缘青蟹(Scyllaserrata)成蟹、作为饲料添加剂投喂一龄草鱼(Ctenopharyngodonidellus)，以复方中草药对锯缘青蟹和草鱼的非特异性免疫能力的影响为指标，并结合对其免疫保护率的影响，评价该复方是否合适作为免疫增强剂。最终并确定该复方的主要成分。
　　结果表明：复方4对大肠杆菌(Escherichiacoli)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)、温和气单胞菌（Aeromonassobria）、鳗弧菌哈维氏弧菌(Vibrioanguillarum)、嗜水气单胞菌(Aeromonashydrophila)、副溶血弧菌（Vibrioparahaemolyticus）、哈维氏弧菌（Vibrioharveyi）7种水产动物病原菌有较强的体外抑制活性，其抑菌圈分别为11.33、11、10、17、10、11.67、13.33mm；最低抑菌浓度（MIC）分别为为62.5、31.25、125、15.63、31.25、31.25、31.25mg/ml；最小杀菌浓度（MBC）分别为125、62.5、125、31.25、125、31.25、31.25mg/ml。
　　该复方药液注射锯缘青蟹，分析青蟹血淋巴中的酚氧化酶（phenoloxidase,PO）、碱性磷酸酶（alkalinephosphatase,AKP）、酸性磷酸酶（acidphosphatase,ACP）、过氧化物酶（peroxidase,POD）、超氧化物歧化酶（superoxidedismudase,SOD）、溶菌酶（lysozyme,LZM）等相关的非特异免疫因子活力。结果表明，青蟹血清酚氧化酶、碱性磷酸酶、酸性磷酸酶、过氧化物酶、溶菌酶的活力和血清抗菌活力比对照组显著提高（ｐ＜0.05），除超氧化物歧化酶外，各种免疫酶活力在注射后先缓慢上升，术后2天达到最高值，然后缓慢下降，至第4天基本回复到正常水平。用副溶血弧菌攻毒7天后，注射复方中药提取液的锯缘青蟹，其免疫保护率达到53.33％。
　　不同浓度的该复方药液浸泡锯缘青蟹，分析青蟹血淋巴中的酚氧化酶、碱性磷酸酶、酸性磷酸酶、过氧化物酶、超氧化物歧化酶、溶菌酶等相关的非特异免疫因子活力。结果表明：在浸泡7天时，高浓度组青蟹血清酚氧化酶、碱性磷酸酶、酸性磷酸酶、过氧化物酶、溶菌酶、超氧化物歧化酶的活力和血清抗菌活力比对照组显著提高（ｐ＜0.05）；低浓度组青蟹溶菌酶、过氧化物酶活力比对照组显著提高（ｐ＜0.05）；各种免疫酶活力在浸泡后先缓慢上升，2天达到最高值，然后缓慢下降，至4天基本回复到正常水平。用副溶血弧菌攻毒7天后，高浓度组的免疫保护率达到20%，低浓度组的免疫保护率为10%。
　　将该复方作为饲料添加剂的人工饲料投喂一龄草鱼，分析草鱼血淋巴中的酸性磷酸酶、碱性磷酸酶和超氧化物歧化酶活力以及血液中白细胞总数、白细胞吞噬功能等免疫指标。结果表明：低浓度组的草鱼血淋巴酸性磷酸酶、碱性磷酸酶和超氧化物歧化酶活力以及血液白细胞总数、白细胞吞噬指数和白细胞吞噬率比对照组和高浓度组显著提高（ｐ＜0.05）；随着投喂时间的延长，各种免疫酶活力不断上升，停药后有回落的趋势。用副溶血弧菌攻毒7天后，高浓度组的免疫保护率达到30.7%，低浓度组的免疫保护率为53.9%。
　　利用紫外分光光度法对该复方的主要成分进行了粗略地分析，初步确定了该复方中的总糖、总蛋白、总黄酮、绿原酸、黄芩苷的百分含量分别为7.097%、0.06%、2.62%、1.544%、2.07%。

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前言

1.1中草药饲料添加剂

1.2锯缘青蟹及草鱼养殖现状及研究热点

1.3 非特异性免疫

1.4 本文的研究目的及意义

第一章 中草药对常见水产动物病原菌的体外抑菌活性研究

1.1材料与仪器

1.2实验方法

1.3 结果与分析

1.4 讨论

第二章 注射复方中草药对锯缘青蟹免疫力的影响

2.1材料与仪器

2.2实验方法

2.3 结果与分析

2.4 讨论

第三章 浸泡复方中草药对锯缘青蟹免疫力的影响

3.1材料与仪器

3.2实验方法

3.3 结果与分析

3.4 讨论

第四章 投喂复方中草药对草鱼免疫力的影响

4.1材料与仪器

4.2实验方法

4.3结果与分析

4.4讨论

第五章 复方中草药中主要成分

5.1材料与仪器

5.2实验方法

5.3 结果与分析

5.4 讨论

参考文献

结论与展望

致谢