尾加压素Ⅱ激活大鼠主动脉外膜成纤维细胞Smad2/3促进结缔组织生长因子表达

摘要

背景和目的：
　　血管纤维化表现为血管壁细胞外基质(Extracellular matrix,ECM)异常增多,过度沉积和基质重塑,导致血管管径缩小和/或管壁增厚,其发生机制是心血管领域面临的重要课题之一,目前尚未完全阐明。人类尾加压素II(Urotensin II,UII)是由11个氨基酸残基组成的缩血管活性肽,具有广泛的生物学效应,现已证明UII能够强烈收缩动脉血管,促进血管平滑肌细胞和成纤维细胞增殖,促进细胞迁移,促进泡沫细胞形成等等,我们课题组前期研究发现,UII能够促进血管外膜成纤维细胞表型转化,并能够激活Smad信号途径,提示它是一种新的促进血管纤维化的缩血管活性肽,在血管纤维化中的作用和机制值得深入研究。另有报道,结缔组织生长因子(Connective tissue growth factor,CTGF)是一种新发现的可刺激成纤维细胞增殖和胶原沉积的生长因子,能够促进成纤维细胞细胞表型转化、细胞增殖、迁移和细胞外基质沉积等。然而,UII和CTGF在血管纤维化中的关系尚未阐明。为此,本工作采用体外培养的大鼠胸主动脉外膜成纤维细胞,以论证UII可否通过激活Smad信号促进血管外膜成纤维细胞表达CTGF的假设,从而探讨血管纤维化和UII作用的新机制,为防治血管纤维化进展提供新的实验依据。
　　方法：
　　1.原代培养雄性SD大鼠主动脉血管外膜成纤维细胞,实验采用第3-5代细胞。待细胞乏血清同步化24小时后,分别用不同浓度的UII(10-10-10-7mol/l)刺激不同时间,采用蛋白免疫印迹试验(Western blot)测定细胞中CTGF的表达变化;明确UII刺激大鼠血管外膜成纤维细胞表达CTGF的浓度及时间曲线。
　　2.采用RNA干扰技术,分别使Smad2和Smad3基因沉默,再以10-9mol/lUII刺激血管外膜成纤维细胞24小时,采用Western blot来检测血管外膜成纤维细胞中CTGF的表达情况。
　　结果：
　　1.UII以浓度依赖性方式刺激大鼠血管外膜成纤维细胞合成CTGF。分别采用10-10-10-7mol/l的UII刺激大鼠血管外膜成纤维细胞24小时,结果发现CTGF表达呈浓度依赖性,其中10-9mol/l组表达量最高(P<0.01)。
　　2.UII以时间依赖的方式刺激血管外膜成纤维细胞合成CTGF。采用10-9mol/lUII分别刺激大鼠血管外膜成纤维细胞0、3、6、12和24小时后,细胞中CTGF表达随刺激时间延长而逐渐增加,至12小时表达量明显增高,24小时进一步增加(P<0.05),表明UII能够以时间依赖方式刺激外膜成纤维细胞表达CTGF。
　　3.通过RNA干扰使Smad2和Smad3基因分别沉默,可以减弱UII诱导的大鼠血管外膜成纤维细胞表达CTGF,siRNA处理组均较UII组降低(P<0.01)。
　　结论：
　　本研究发现UII能够以浓度和时间依赖的方式促进大鼠血管外膜成纤维细胞表达CTGF;Smad2和Smad3在介导UII促进大鼠血管外膜成纤维细胞表达CTGF中发挥了重要作用。

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缩略词表

目录

第一章 前言

1.1 研究背景

1.2 研究目的及意义

第二章 材料与方法

2.1实验材料

2.2 实验方法

2.3实验分组

2.4 指标检测：免疫印迹法(Western Blot)检测细胞CTGF的表达

第三章 实验结果

3.1 原代培养细胞：组织贴块法培养 SD 大鼠主动脉外膜成纤维细胞（图3-1）

3.2 UII对血管外膜成纤维细胞表达CTGF的影响

第四章 讨 论

第五章 结论

参考文献

附录

附录一 综述

参考文献：

附录二 研究生期间撰写和发表的论文

附录三 个人简历

致谢