RNA干扰对三阴型乳腺癌细胞中乳腺癌特异基因1的沉默作用及对细胞周期与凋亡影响的研究

摘要

目的：探讨在三阴型乳腺癌MDA-MB-231细胞中BCSG1-siRNA干扰质粒沉默BCSG1表达的效果，考察siRNA-BCSG1沉默BCSG1对乳腺癌细胞周期进程和凋亡的影响，评价以BCSG1作为三阴型乳腺癌治疗靶点调控细胞周期和凋亡的可能。
　　方法：对 BCSG-1的已知 cDNA序列，设计并体外转录合成2条特异性siRNA(siRNA-BCSG1-1、siRNA-BCSG1-2)，1条非特异性siRNA，用脂质体介导转染到“三阴”乳腺癌MDA-MB-231细胞株72 h，同时设空白对照组(空脂质体），通过实时荧光半定量聚合酶链式反应RT-PCR检测空白对照组(空脂质体载体)、阴性对照组(无关序列载体)及不同 siRNA-BSCG1干扰质粒乳腺癌细胞组的BCSGl mRNA表达水平分别为：5.36519E-05±5.4524E-06、6.1464E-05±9.49473E-06、3.63077E-05±6.59757E-05、6.05663E-06±1.54133E-06；使用流式细胞术检测各组细胞的周期中G0/G1时相细胞比例分别为41.20±8.36、51.59±4.77、64.21±1.46、81.70±1.27；S时相细胞比例分别为41.91±2.74、38.23±5.87、26.30±1.60、13.00±1.10；凋亡率（％）情况分别为：2.7±0.2、2.0±1.1、27.1±0.3、33.9±0.9。
　　结果：4组中BCSG-1 mRNA的表达结果比较，差异有统计学意义(P<0．05)。与各对照组比较，siRNA-BCSG1转染的2组 MDA-MB-231细胞中BCSGl mRNA的表达均减弱，差异均有统计学意义(P<0．05)；siRNA-BCSG1转染的2组细胞转染后72h各组处于G0/G1期的细胞比例明显增高，而S期细胞比例明显降低,G2/M期细胞相对增多；细胞凋亡率治疗组比对照组增加明显（P<0．01)。
　　结论：siRNA-BCSG1能有效沉默三阴型乳腺癌MDA-MB-231细胞中的BCSG1而抑制BCSG1 mRNA的表达；并使细胞周期时相G1-S的转换停止而阻滞在G1期，产生凋亡效应。

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第1章 前言

第2章 材料及方法

2.1 实验材料

2.2实验仪器

2.3 实验方法

2.4统计学方法

第3章 结果

3.1 各实验组载体构建质粒转染结果

3.2实时荧光半定量聚合酶链式反应RT-PCR 检测结果

3.3 流式细胞术细胞周期检测结果

3.4 流式细胞仪检测细胞凋亡结果

第4章 讨论

4.1 BCSG1在乳腺癌组织中表达的意义

4.2 RNA干扰技术(RNAi)及小干扰RNA(SiRNA)

4.3 载体构建siRNA-BCSG1质粒及转染效果

4.4 RT-PCR检测siRNA-BCSG1干扰效果

4.5 流式细胞术检测细胞周期及凋亡率的意义

4.6 本研究创新之处

第5章 结论

参考文献

综述

致谢

个人简历