大鼠非酒精性脂肪肝：磁共振多回波3D GRE Dixon技术量化实验研究

摘要

1.目的：
　　以病理组织学检测及肝脂检测结果作为参考标准，旨对磁共振多回波3D GRE Dixon法评价非酒精性脂肪肝（nonalcoholic fatty liver disease，NAFLD）的脂肪含量可行性。
　　2.材料与方法：
　　2.1.大鼠模型制造
　　24只SD大鼠，随机分成两组，第一组（A）为对照组6只，第二组（B）为实验组18只，A组采用普通饲料喂养；B组采用高脂饲料喂养8、12、16周。
　　高脂饲料配方：基础饲料87.5％，猪油10%，胆固醇2%，胆盐0.5%组成。
　　研究用SD大鼠适应性饲养一周后，随机分为对照组与实验组；高脂造模实验组随机又分成三小组，分别饲养8、12、16周。
　　对照组予普通饲料喂养。高脂造模实验组予高脂配方饲料喂养，均自由饮水。
　　对照组6只和于第8、12、16周实验组各6只进行肝脏磁共振扫描、肝脂检测及肝脏病理组织活检检测。
　　2.2.磁共振扫描
　　采用德国Siemens公司1.5T开放式磁共振成像系统Magnetom Espree设备及腕线圈。试验动物准备，将10%水合氯醛按0.3ml/100g腹腔麻醉注入大鼠腹腔进行腹腔麻醉。用纱布包裹大鼠进行腹部固定，俯卧固定于自制模板上。扫描采用头先进，定位于腹部中心，线圈尽量贴近腹部。扫描序列包括：定位、冠状位T1WI压脂序列、矢状位T1WI压脂序列、冠状位T2WI不压脂序列及多回波3D GRE Dixon序列。
　　多回波3D GRE Dixon成像序列参数：TR=12.7ms，TE=2.39、4.78、6.08、7.40、8.72、10.02ms,翻转角度10°，视野（FOV）=24×24cm，激励次数=1次，矩阵=256×256，层厚=1.00mm，60 slices per slab。扫描前行自动匀场。成像时间约1分38 秒。
　　在以灰阶表示的肝脏脂质含量图中操作者标识感兴趣区（Region Of Interest，ROI），感兴趣区（Region Of Interest，ROI）大小5mm×5mm，位置选定以尽量避开肝内血管、肝管和肝边缘为原则，即可读出感兴趣区（Region Of Interest，ROI）的脂肪分数。
　　肝脂检测实验SD大鼠处理：肝脂检测：将大鼠用10%水合氯醛麻醉处死后，手术刀腹部正中切口切开，小心离断腹壁血管，暴露完整肝脏，无菌条件下迅速分离取出肝脏，速取肝组织约500mg，置于锡箔纸内，于-80℃液氮中保存。
　　肝脏病理组织活检检测：预先准备好10%福尔马林固定液，分装在标准瓶内，贴好标签，做好标记。肝组织进行常规石蜡包埋、切片及 HE染色后，每张切片观察5-8个视野，然后分别对肝脏脂肪变性程度、炎症的程度进行初步分级、评分。
　　非酒精性脂肪性肝病NAFLD的病理组织学诊断及病理参考Kleiner[1]分级标准，依据单位面积内大炮性脂变细胞的所占百分比，将非酒精性脂肪肝NAFLD病理进行如下分级：0级-未见脂肪变肝细胞；1级-脂肪变肝细胞的所占比例＜33%；2级脂肪变肝细胞所占比例33-66%；3级-脂肪变肝细胞比例所占比例＞66%。
　　统计学分析：所有数据资料均使用SPSS19.0统计软件包进行处理。计量资料采用均数表示。首先进行方差是否齐性检验，运用Levene方法进行检验；不同病理级别间及不同实验分组间各指标的组间比较运用单因素方差分析；方差齐性，多组间均数的多重比较采用SNK检验，方差不齐时，采用Tamhane方法；测出的甘油三酯含量与磁共振得出的脂肪分数及病理等级之间的比较将使用Pearson相关分析。
　　3.结果：
　　试剂盒检测大鼠脂肪肝甘油三酯含量对照组与8周组结果，应用单因素方差分析，组间结果差异无统计学意义（ρ＞0.05）；其它组间结果差异比较均有统计学意义（ρ＜0.05)；采用多回波3D GRE Dixon技术采集获得的数据，计算所得对照组及8周间脂肪分数结果差异无统计学意义（ρ＞0.05），而其它组间结果差异有统计学意义（ρ＜0.05)。
　　以病理活检结果为标准，1级与3级间及2级与3级间比较，结果差异有统计学意义（ρ＜0.05)；1级与2级间结果差异比较无统计学意义（ρ＞0.05）。结果提示运用多回波3D Dixon技术扫描脂肪分数可以区分轻度及重度的脂肪肝。使用Pearson相关分析,运用多回波3D GRE Dixon技术测得的大鼠脂肪分数与采用试剂盒得出的脂肪肝甘油三酯含量呈显著正相关（r=0.954，ρ=0.000＜0.05），较与病理活检得出的病理等级相关性高（r=0.892，ρ=0.000＜0.05)
　　4.结论：
　　本研究结果显示磁共振多回波3D GRE Dixon技术获取数据具有可判断非酒精性脂肪肝程度能力。

目录

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声明

中文摘要

英文摘要

目录

一、前言

二、资料与方法

1.实验材料

2.实验方法

三、结果

1. 病理组织学检查结果

2. 肝脂检测结果

3. 磁共振检测结果

4. 脂肪肝脂肪分数与甘油三酯含量及病理等级之间相关分析

四、讨论

1.非酒精性脂肪肝（NAFLD）检测方法的现状

2. 非酒精性脂肪肝的动物模型

3. 磁共振定量检测非酒精性脂肪肝的意义

4.病理活检与多回波3D GRE Dixon相关性讨论

5.肝脏甘油三酯提取测量脂肪含量与多回波3D GRE Dixon相关性讨论

6. 本论文不足

五、结论

参考文献

附图及说明

致谢