脾胃湿热证湿、热偏重量化的实验研究

摘要

目的: 脾胃湿热证是临床常见的证候，其在病变过程中存在湿偏重、热偏重及湿热并重等病理变化，在临床诊断上比较困难。本课题通过观察大鼠的一般状态、尿液中的水通道蛋白2（AQP2）、血浆淋巴细胞热休克蛋白70（HSP70）、胃窦P物质（SP）及生长抑素（SS）、胃及十二指肠的病理变化等指标，探讨脾胃湿热证湿、热偏重的本质和它们之间的差异，为脾胃湿热证湿、热偏重的量化提供实验依据；通过观察在三仁汤、白虎加苍术汤的干预下脾胃湿热证湿偏重、热偏重大鼠模型一般状况及一系列实验指标的变化，从不同角度揭示三仁汤、白虎加苍术汤的作用机理。 方法 1．药物与饲料 ①附子干姜汤的药物组成：制附子、干姜②三仁汤的药物组成：苦杏仁、法半夏、滑石、薏苡仁、白豆蔻、厚朴、通草、淡竹叶③白虎加苍术汤的药物组成：苍术、粳米、知母、石膏、甘草。 高糖高脂饲料：普通饲料中混入12%猪油，8%蜂蜜加工而成。 2．分组 SPF级SD大鼠40只，随机分为5组，每组8只，雌雄各半，即正常对照组、湿偏重组、三仁汤组、热偏重组和白虎加苍术汤组。 3．造模 在肥甘饮食、酒伤、湿热环境、病原微生物的综合因素作用下，建立脾胃湿热证的湿偏重型、热偏重型的动物模型：①正常对照组：在20～28℃温度，50%～70%相对湿度的环境下，以普通混合饲料喂养：②湿偏重组：高糖高脂饲料+造模箱+白酒+大肠杆菌；③三仁汤组：高糖高脂饲料+造模箱+白酒+大肠杆菌+三仁汤；④热偏重组：高糖高脂+造模箱+附子干姜煎剂+大肠杆菌；⑤白虎加苍术汤组：高糖高脂+造模箱+附子干姜煎剂+大肠杆菌+白虎加苍术汤。 4．观察及检测指标 对比观察实验大鼠造模前后的一般状态、体重、肛温、24小时尿量、大便性状等的变化。用ELISA法检测大鼠尿液中的AQP2、流式细胞仪检测血浆淋巴细胞HSP70、放射免疫法检测胃窦匀浆SP及SS的含量。光镜下观察大鼠的胃、十二指肠的病理变化。 5．统计学方法 用SPSS软件（13．0版）处理，实验结果的数据类型为计量资料，各数据以均数±标准差（x±s）表示。体重、体温采用重复测量的方差分析进行比较；24小时尿量、AQP2含量、HSP70、SP及SS含量采用One-Way ANOVA对各组实验结果进行方差分析，组间多重比较用LSD法检验，以P<0．05为有显著性差异。 结果 1．大鼠的一般状态 正常对照组：该组大鼠在喂养4周期间，毛色光泽、食欲好、活动正常，大便正常。湿偏重组、热偏重组：随着造模时间的推移，大部分动物出现倦怠，嗜卧懒动，反应迟钝，毛发蓬松，颜色枯槁；从造模第7天开始，均出现大便溏泻或粘腻，湿偏重组更严重；进入造模箱后，大便溏泻或粘腻症状加重，渐见肛周污秽。三仁汤组、白虎加苍术汤组：大鼠造模后出现与模型组相同的症状，经三仁汤、白虎加苍术汤灌服后，症状有所减轻。 2．体重、体温、24小时尿量变化 随着造模时间的延长，进入造模箱后4个模型组的体重下降，不同时间点模型组的体重均低于正常对照组（P<0．01），经三仁汤、白虎加苍术汤的治疗后体重恢复正常增长水平。模型组大鼠进入造模箱后体温升高，灌喂大肠杆菌后体温急剧上升，与正常对照组比较差异有统计学意义（P<0．05）；经三仁汤、白虎加苍术汤的治疗后体温恢复正常，而湿偏重组、热偏重组体温无显著改善。湿偏重组、热偏重组24小时尿量较正常对照组显著减少（P<0．01），三仁汤组、白虎加苍术汤组24小时尿量与正常对照组比较差异无显著性差异（P>0．05）。 3．实验室指标检测 湿偏重组、热偏重组尿液AQP2的含量显著高于正常对照组（P<0．01），而且湿偏重组比热偏重组增高显著（P<0．01）。三仁汤组、白虎加苍术汤组AQP2含量恢复正常水平，与正常对照组比较差异无显著性意义（P>0．05）。 湿偏重组、热偏重组血浆淋巴细胞HSP70表达高于正常对照组（P<0．01），而且热偏重组比湿偏重组增高显著（P<0．01）。三仁汤组、白虎加苍术汤组HSP70表达恢复正常水平，与正常对照组比较差异无显著差异（P>0．05）。 湿偏重组、热偏重组大鼠胃窦SP、SS较正常对照组显著降低（P<0．01）；并且湿偏重组SP、SS水平低于热偏重组（P<0．05）。三仁汤组、白虎加苍术汤组SP、SS含量恢复正常水平，与正常对照组比较无显著差异（P>0．05）。 4．胃、十二指肠病理切片 正常对照组胃粘膜层可见少量炎症细胞，粘膜下层无组织水肿，十二指肠绒毛上皮较完整。湿偏重组、热偏重组大鼠胃及十二指肠病理切片无较大差异，均可见：（1）胃粘膜层有大量中性粒细胞、嗜酸性粒细胞浸润，血管扩张充血；胃粘膜下层组织水肿，中性粒细胞、嗜酸性粒细胞浸润显著；（2）十二指肠可见绒毛上皮细胞脱落，大量炎症细胞渗出。三仁汤组、白虎加苍术汤组切片均可见胃粘膜层炎症细胞减少，血管无扩张充血，粘膜下层无组织水肿，十二指肠绒毛上皮较完整，仅见少量炎症细胞浸润。 结论 实验结果显示，在肥甘饮食、湿热环境、病原微生物、酒伤、内湿、热的综合作用下，可成功复制脾胃湿热证的湿偏重型、热偏重型的动物模型。湿偏重组、热偏重组尿液AQP2的含量增高，而且湿偏重组比热偏重组增高显著，可见其向外利水的生理作用出现异常；AQP2可作为脾胃湿热证“湿”的形成、“湿”的量化的一个重要指标。湿偏重组、热偏重组血浆淋巴细胞HSP70表达显著增加，而且热偏重组比湿偏重组增高显著；这表明大鼠在复合因素的作用下，机体处于自我调节、自我保护状态，HSP70可作为量化脾胃湿热证湿、热偏重的重要指标之一。湿偏重组、热偏重组大鼠胃窦SP、SS含量降低，湿偏重组SP、SS水平更低于热偏重组；SP、SS的含量能客观地反映胃肠功能的状态，这亦能解释湿偏重证、热偏重证临床所表现的消化系统症状。湿偏重组、热偏重组大鼠胃、十二指肠出现炎症病变，表明脾胃湿热证临床所表现的症状是有其形态结构基础的。 三仁汤、白虎加苍术汤可能存在以下作用：1）能恢复由复合因素所致的湿偏重证、热偏重证动物模型的一般状态；2）调节尿液中AQP2的含量，恢复机体正常的向外利水功能；3）降低热应激所导致的HSP70增高的作用；4）调节机体胃窦中SP、SS的水平；5）部分修复模型组大鼠胃、十二指肠的组织结构的功能。

目录

文摘

英文文摘

声明

第1章研究背景

1.1中医对脾胃湿热证的认识

1.2脾胃湿热证的现代研究进展

1.3脾胃湿热证动物模型的建立

1.4观察及检测指标的选择

1.5 结语

第2章实验研究

2.1 材料

2.2.方法

2.3 结果

2.4 讨论

2.5 结论

参考文献

硕士期间成果

致 谢