柴胡白芍不同比例配伍应用抗惊厥作用的实验研究

摘要

背景: 癫痫是神经系统的常见疾病，病程长且反复发作，它是一组由大脑神经元反复异常同步化放电所引起的，以发作性、短暂性、重复性及通常为刻板性的中枢神经系统功能失常为特征的临床综合征。癫痫由于其临床发作具有发作性、短暂性、重复性的特点，长期反复发作不仅给患者造成身体上的危害，还会严重影响患者的生活质量，导致一系列精神心理问题，给家庭和社会带来沉重负担。癫痫患者经常具有的耻辱感、不合群、活动受限、过度保护、孤独感等因素都有可能影响患者的生活质量。因此，如何正确、有效地防治癫痫已成为医学界广泛关注的问题。 据WHO2005年公布的流行病学调查结果显示:世界上有5000万的癫痫患者，且其平均每年发病率为0.5‰-1‰，而我国癫痫的发病率约23/10万/年，现有癫痫患者900多万人。目前对于癫痫的治疗，临床上仍以口服抗癫痫药物为主。虽然当前用于临床的抗癫痫药物能使80％左右的患者病情得到控制，70％左右的患者病情得到完全缓解，但癫痫病程长，多数抗癫痫药不良反应较大，长期用药有毒副反应，且价格昂贵，给患者带来了较大的负担。而传统中医药治疗本病显示出独特的优势，多种临床常用方药具有较好的抗癫痫作用，并且具有缓效，作用时间长，副作用少，毒副反应轻等特点。中药药对常作为方药的核心，应用于临床。本课题通过对中药药对配伍的研究，来探索其抗癫痫的作用机制，从而为中医药抗癫痫提供可靠的实验依据。 癫痫属于中医“痫病”范畴，痫病的病机与肝的疏泄功能异常关系密切，其风、痰、瘀产生均为肝失疏泄、条达的病理变化，因而治肝是痫病的关键所在。现代名老中医熊辅信和陈宝田教授尤推崇癫痫“从肝论治”，临床多选用柴胡类复方进行癫痫治疗。柴胡白芍药对为疏肝养肝之常用配伍，柴胡具有疏肝解郁、升举阳气之功效，其有效成分柴胡皂苷具有提高免疫力、抗炎及抗惊厥作用。白芍具有养血柔肝，平抑肝阳之功效，其有效成分白芍苷具有镇痛、镇静、抗惊厥作用。柴胡轻清辛散，疏肝解郁;白芍酸苦微寒，敛阴柔肝，缓急止痛。柴胡、白芍配伍应用，一散一收，以白芍之酸敛，制柴胡之辛散，用柴胡之辛散，又制芍药之酸敛，且柴胡得白芍而无劫阴之弊;柴胡疏肝气，白芍养肝血，二药配伍既养肝体又助肝用，符合肝脏的生理特点。在临床癫痫治疗方面，柴胡、白芍配伍应用有明确疗效。然而在临床中柴胡白芍以何种比例配伍能取得治疗癫痫的最佳疗效文献报道甚少。 癫痫的发作类型多样，发病机制复杂，因此借助实验动物建立能够模拟人类癫痫发作的实验动物癫痫模型，探讨癫痫的发病机制已成为当前神经科学研究的热点之一。目前世界上公认的痫性发作模型包括最大电休克模型、戊四氮模型、士的宁模型、匹罗卡品模型等;因作用部位及作用机制不同的癫痫模型，其抗癫痫药物的作用机制也不同。本课题组通过建立四种实验动物癫痫模型，观察柴胡白芍配伍应用对实验性惊厥小鼠痫性发作的影响。 目的: 本实验以癫痫“从肝论治”为出发点，通过观察柴胡、白芍不同比例配伍应用对实验性惊厥小鼠的痫性发作的影响，明确柴胡白芍抗实验性癫痫的最佳配伍比例及其配伍规律，指导临床癫痫的中医药治疗。探讨柴胡、白芍配伍应用可能存在的作用途径及机制，为癫痫“从肝论治”的中医理论提供实验依据。 方法: 1.最大电惊厥(MES)模型 实验前筛选符合MES模型条件的健康雄性SPF级昆明小鼠70只，随机分为7组，每组10只，即模型组（A组），阳性药对照组（B组），柴芍2∶1组（C组），柴芍1∶1组（D组），柴胡组（E组），白芍组（F组），柴芍1∶2组（G组）。模型组小鼠给予等体积生理盐水灌胃给药，阳性药对照组小鼠给予苯妥英钠25mg.kg-1灌胃给药，余各组小鼠均按10.4g.kg-1灌胃给药，各组连续给药7d，每日2次。在末次给药60min后，使用YSD-4G药理生理实验多用仪，对小鼠进行MES实验，刺激参数设定为100V，2Hz，单次刺激，以后肢强直性伸直为惊厥指标，记录其惊厥数，计算惊厥率。 2.戊四氮(PTZ)诱发惊厥模型 选取雄性SPF级昆明小鼠70只，随机分为7组，每组10只，即模型组（A组），阳性药对照组（B组），柴芍2∶1组（C组），柴芍1∶1组（D组），柴胡组（E组），白芍组（F组），柴芍1∶2组（G组）。模型组小鼠给予等体积生理盐水灌胃给药，阳性药对照组小鼠给予地西泮4mg/kg灌胃给药，余各组小鼠均按10.4g.kg-1灌胃给药，各组连续给药7d，每日2次。在末次给药60min后，各组予戊四氮85mg/kg腹腔注射，连续观察30min，记录小鼠阵发性痉挛潜伏期（即从注射PTZ开始至相当于1-3级发作的时间）、强直性惊厥潜伏期（即从注射PTZ开始至相当于5级发作的时间）、死亡潜伏期。 3.士的宁诱发惊厥模型 实验分组及给药同戊四氮模型，在末次给药60min后，各组予士的宁2mg/kg腹腔注射，连续观察15min，记录小鼠阵挛潜伏期（即从注射PTZ开始至相当于1-3级发作的时间）、死亡潜伏期，计算15min内小鼠死亡只数。 4.匹鲁卡品诱发惊厥模型 实验分组及给药时间同戊四氮模型，在末次给药60mi后，腹腔注射匹鲁卡品400mg/kg，连续观察30min，记录小鼠阵挛潜伏期（即从注射PTZ开始至相当于1-3级发作的时间）、死亡潜伏期，计算30min内小鼠死亡只数。 5.统计学方法 数据用SPSS13.0软件进行统计学分析，多样本均数的比较采用One-WayANOVA方差分析，组间多重比较若符合方差齐性检验时用Tukey法，若不符合则用Dunnett' T3法，计数资料及率的比较用卡方检验。以P＜0.05均为有统计学意义。 结果: 1.柴胡白芍不同比例配伍应用对MES所致小鼠惊厥的影响 与A组相比，各组均能不同程度的抑制MES所致小鼠后肢强直性伸直的发生;其中B、C组均能显著降低MES模型小鼠惊厥率(P＜0.05)。 2.柴胡白芍不同比例配伍应用对戊四氮所致小鼠惊厥的影响 与A组相比，B、C、D、G组均能显著延长戊四氮所致小鼠的阵发性痉挛潜伏期(P＜0.05)，尤以B、C组差异显著(P＜0.01);B、C、D组同样能明显延长戊四氮所致小鼠的强直性惊厥潜伏期(P＜0.05);在死亡潜伏期的比较中B、C组与A组比较，差异显著(P＜0.05)。 3.柴胡白芍不同比例配伍应用对士的宁致小鼠惊厥的影响 与A组相比，B组能够显著延长小鼠的阵挛潜伏期、死亡潜伏期(P＜0.05)，其余各组对小鼠的阵挛潜伏期、死亡潜伏期，无显著影响(P＞0.05)。 4.柴胡白芍不同比例配伍应用对匹罗卡品致小鼠惊厥的影响 与A组相比，除B组外，各组小鼠的阵挛潜伏期均无显著差异性（P＞0.05）;B、C、D、E、G组均能显著延长匹罗卡品所致小鼠的死亡潜伏期(P＜0.05)，尤以B组差异显著(P＜0.01)。 结论: 1.成功复制了最大电惊厥、戊四氮、士的宁及匹罗卡品诱发的急性小鼠癫痫模型。 2.柴胡-白芍配伍应用对最大电惊厥、戊四氮、匹罗卡品诱发的急性小鼠癫痫模型具有抗惊厥作用。但其抗惊厥作用弱于地西泮或苯妥英钠。 3.柴胡-白芍配伍应用具有良好的抗惊厥的作用，其抗惊厥作用优于单用柴胡或白芍，其中以柴胡-白芍2∶1配伍比例的抗惊厥作用最好。

目录

摘要

第一章 前言

1．1 癫痫的概述

1．2 癫痫的流行病学调查

1．3 癫痫的病因病机

1．4 癫痫的治疗现状

1．5 实验用急性癫痫动物模型的选择

1．6 柴胡、白芍的功能、特性及在治疗癫痫方面的研究进展

1．7 本论文的选题依据及研究目的

参考文献

第二章 材料与方法

1 最大电惊厥模型的建立

2 戊四氮惊厥模型的建立

3 士的宁惊厥模型的建立

4 匹罗卡品惊厥模型的建立

5 统计学方法

第三章 结果

3．1 柴胡白芍不同比例配伍应用对MES所致小鼠惊厥的影响

3．2 柴胡白芍不同比例配伍应用对戊四氮所致小鼠惊厥的影响

3．3 柴胡白芍不同比例配伍应用对士的宁致小鼠惊厥的影响

3．4 柴胡白芍不同比例配伍应用对匹罗卡品致小鼠惊厥的影响

第四章 讨论

1 中医药“从肝论治”癫痫

2 柴胡白芍配伍理论、临床应用和现代研究

3 柴胡白芍不同比例配伍应用在四种癫痫动物模型中的意义及影响

参考文献

第五章 全文小结

攻读学位期间研究成果

致谢

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