新生儿缺氧缺血脑损伤大鼠模型制备以及间充质干细胞对模型损伤疗效的研究

摘要

目的:本实验采用高原低压环境模拟仓结合大鼠游泳运动的方法制备高原地区新生儿缺氧缺血性脑病大鼠模型，观察其行为学、脑组织病理变化、脑TTC染色和电镜下红细胞形态观察，为HIE在高原地区的临床研究做基础实验准备。
　　方法:将SD新生大鼠（10日龄）32只，随机分为4组:对照组为A组，实验组:B组（2000m组）、C组（4000m组）、D组（6000m组）。对照组大鼠在屏障环境中饲养，实验组大鼠置于高原低压环境模拟仓结合运动的方式在舱内游泳槽进行60 min/d的游泳运动，且在高原低压环境模拟舱内生活时间每天不少于20小时。每组大鼠分别在第3、7、11、15d用Zea Longa5分制评分标准进行行为学评分并且于第15d采集静脉血，在扫描电镜下观察红细胞形态。每组处死后取脑组织进行HE染色和TTC染色。模型制作成功后，分为3组即对照组:8只:HIE+PBS组（模型组）:8只，先制成HIE模型，然后给予PBS作为安慰治疗;HIE+MSC组（治疗组）:8只，先制成HIE模型，然后给予MSC治疗。分别于干预后第5、7、14、21天进行神经行为学检测(Rotarod Test旋转实验和Morris水迷宫测试)。21日后处死采用组织切片HE染色，观察新生大鼠脑损伤的病理变化。
　　结果:1、神经病学评分对照组行为正常，在行为学评分中为0分，而实验组大鼠行为学异常，主要表现为一侧肢体感觉和运动功能障碍和平衡功能的异常。实验组大鼠评分随海拔升高而升高，行为异常程度与海拔高度呈正相关。并且实验组大鼠在第3、7、11、15d行为学评分逐渐升高，这一数据表明长期生活中缺氧环境中会使脑损伤程度日趋加重，实验表明对照组与各实验组差异有显著性意义（p＜0.05）海拔6000m组与对照组比较差异非常显著(p＜0.01)。2、脑组织病理学改变对照组脑组织神经细胞、神经胶质细胞大小、外形正常，未出现脑水肿;在海拔2000m大脑皮质轻度萎缩，神经元细胞轻度水肿，胶质细胞轻度增生;在海拔4000m大脑皮质中度萎缩，神经元细胞中度水肿，胶质细胞中度增生;在海拔6000m室管膜细胞重度水肿。3、TTC染色结果TTC(2，3，5-氯化三苯基四氮唑)是脂溶性光敏感复合物，它是呼吸链中吡啶—核苷结构酶系统的质子受体，与正常组织中的脱氢酶反应而呈红色，而缺氧缺血组织内脱氢酶活性下降，不能反应，故不会产生变化呈苍白[16]。对照组TTC染色结果为红色，未出现缺氧缺血表现;海拔2000m出现轻度改变，大脑皮质出现小片苍白;海拔4000m大脑皮质区可明显看见苍白区域;海拔6000m接近一半出现苍白区。利用Image-Pro Plus做出海拔2000m组脑缺氧面积为26.6％，海拔4000m组脑缺氧面积为34.3％，海拔6000m组脑缺氧面积为56.6％，而对照组则为正常。4、电镜下红细胞在扫描电镜下可以看见对照组红细胞呈双凹圆盘状，在海拔2000m下电镜表现为轻度改变呈帽状结构;在海拔4000m下表现为不规则形;在海拔6000m下表现为锯齿状，部分红细胞会出现空洞，崩解。间充质干细胞给予治疗:5、Rotarod Test结果显示造模后第5天模型组与治疗组大鼠在转轮中坚持时间明显下降，与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05);造模后第7、14、21天，模型组与治疗组大鼠在转轮中坚持时间有升高趋势，其中治疗组升高趋势明显高于模型组(P＜0.05)，第21天模型组与治疗组大鼠在转轮中坚持时间比较差异有统计学意义(P＜0.05)。6、Morris水迷宫结果显示3组大鼠的逃避潜伏期显示随训练天数增加而逃避时间逐渐缩短，前5天的总体学习成绩的组间差异有统计学意义(P＜0.01)。第7天开始治疗组时间逐渐缩短，第21天治疗组与模型组大鼠的逃避潜伏期在各个时间点的差异非常显著。7、病理结果:模型组大鼠出现海马区神经元水肿、核染色质结构不清、空泡形成等病理变化，而治疗组病理损伤明显减轻。
　　结论:本研究采用高原低压环境模拟仓结合运动模拟高原环境制作新生儿缺氧缺血性脑病(HIE)的模型，该模型稳定、可靠，比其他方法更符合缺血缺氧脑损伤的发病机理，与临床贴近，可用于相关研究。间充质干细胞治疗后发现间充质干细胞可促进大鼠缺血脑损伤后神经功能恢复。

目录

摘要

前言

第一章 高原缺氧缺血脑病模型的建立

1 材料与方法

2 结果

3 讨论

第二章 干细胞对其新生大鼠缺血缺氧脑损伤治疗的初步探究

1 材料与方法

2 结果

3 讨论

参考文献

成果

致谢

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