夏荔芪胶囊对大鼠良性前列腺增生的疗效及初步机制探讨

摘要

目的：
　　1、通过对去势后SD大鼠皮下注射丙酸睾酮建立BPH模型，使用夏荔芪胶囊进行干预并探讨其对BPH大鼠前列腺组织形态学的影响;
　　2、探讨夏荔芪胶囊对BPH大鼠血清及前列腺组织双氢睾酮(DHT)含量的影响;
　　3、研究夏荔芪胶囊对BPH大鼠前列腺组织中增殖细胞核抗原(PCNA)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（caspase-3）表达水平的影响;
　　4、探究夏荔芪胶囊对BPH大鼠前列腺组织中碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)表达水平的影响;
　　5、探索夏荔芪胶囊对BPH大鼠血清及前列腺组织超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量的影响;
　　6、研究夏荔芪胶囊对BPH大鼠血清及前列腺组织白介素-8（IL-8）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）表达水平的影响。
　　方法：
　　将雄性SD大鼠随机分为5组，每组10只。A组:空白对照组（假手术组）;B组:模型对照组;C组:夏荔芪胶囊高剂量组（1.20 g/kg·d，30d）;D组:夏荔芪胶囊低剂量组(0.61 g/kg·d，30 d);E组:阳性对照组（非那雄胺0.8 mg/kg·d，30 d)。将SD大鼠称重后，麻醉下无菌切除双侧睾丸，A组行假手术。术后第8d开始皮下注射丙酸睾酮5 mg/kg·d，连续30 d，A组皮下注射等体积生理盐水。造模期间常规饲养，1个月后麻醉下行前列腺组织活检以确认造模成功，按前述方法连续用药1个月。每组于末次给药后称重，麻醉后取血，切开腹部，观察前列腺组织外观及周围粘连情况，完整剥离前列腺，用滤纸吸干后称重。取部分前列腺组织，用10％甲醛溶液固定后制备前列腺病理组织切片，HE染色后镜下观察前列腺组织病理变化情况;使用免疫组化及免疫荧光法检测各组大鼠前列腺组织PCNA、caspase-3及bFGF的表达情况;使用酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)检测各组大鼠血清及前列腺组织中SOD、MDA、DHT、IL-8、TNF-α的表达水平。
　　使用SPSS20.0软件进行数据分析，计量资料以(x±)SD表示，经正态性检验和方差齐性检验后，方差齐者组间总体比较使用单因素方差分析(One-WayANOVA)，方差不齐则进行秩和检验;有差异者进一步采用最小显著差异法(LSD-t)做两两比较。P＜0.05为差异有统计学意义。
　　结果：
　　1、各组大鼠前列腺湿重及前列腺指数改变情况
　　与空白组相比，模型组的前列腺湿重明显增加[(1326.15±60.20) mg vs.(471.38±17.96) mg，P＜0.01];而夏荔芪高、低治疗组[(914.33±36.08) mg;(1099.76±46.28) mg]及阳性药物对照组[(817.25±53.99) mg]的前列腺湿重较模型组则明显降低(P＜0.01);且夏荔芪高剂量组较夏荔芪低剂量组的前列腺湿重降低更明显(P＜0.01)，而各治疗组中阳性对照组前列腺湿重降低最明显。
　　与空白组相比，模型组的前列腺指数明显增加[(1.06±0.06) vs.(2.89±0.18)，P＜0.01];而与模型组相比，夏荔芪高、低治疗组(2.02±0.08;2.39±0.11)及阳性药物对照组(1.83±0.10)的前列腺指数则明显降低(P＜0.01);且夏荔芪高剂量组较夏荔芪低剂量组的前列腺指数下降更显著(P＜0.01)，而各治疗组中阳性对照组前列腺指数下降最显著。
　　2、各组大鼠前列腺组织大体情况及病理组织学改变
　　肉眼观察，空白组大鼠前列腺色泽淡红、腺体组织质软，有弹性，表面光滑无结节，与周围其他组织无粘连，容易分离。模型组大鼠前列腺体积增大，色泽暗红，欠光泽，质地较韧，弹性差，局部与周围组织无粘连，易剥离。夏荔芪治疗组前列腺腺体质地较柔软，有弹性，有光泽，无局部结节，与周围组织无粘连，以高剂量组改善更明显;阳性药物对照组前列腺腺体与周围组织无粘连，偶可触及结节，弹性稍差。
　　HE染色光镜下结果显示，空白组大鼠前列腺组织结构完整，腺上皮细胞排列整齐，腺腔内可见较多染色为粉红色的分泌物，间质未见水肿，有少量纤维组织，偶见极少量炎性细胞浸润;模型组大鼠前列腺腺腔狭窄，部分腺腔闭塞，腺上皮细胞有不同程度增生，腺腔内有少量分泌物，间质内可见大量纤维结缔组织增生，腺泡腔内及组织间隙内可见少量炎性细胞浸润;各夏荔芪治疗组及阳性药物治疗组大鼠前列腺腺腔结构基本完整，未见基底膜破坏，腺上皮增生不明显，间质内纤维组织少量增生，无或可见少量炎性细胞浸润，其中以高剂量组前列腺组织改善较为明显;阳性药物治疗组前列腺形态学改变介于高、低剂量组两者之间。
　　3、各组大鼠血清及前列腺组织中DHT表达情况
　　检测结果表明，与空白对照组比较，模型组大鼠血清及前列腺组织中DHT含量[(18.04±0.62) ng/ml及(186.14±6.26) pg/mg vs.(7.51±0.67) ng/ml及(79.32±6.06) pg/mg]均明显增高，差异有统计学意义(P＜0.01)。与模型组比较，各治疗组大鼠血清及前列腺组织匀浆中的DHT含量均明显降低，差异具有统计学意义(P＜0.01)，其中，以非那雄胺组[(10.11±0.78) ng/ml及(100.63±5.78) pg/mg]下降最明显;而夏荔芪高剂量组血清及前列腺组织中DHT含量均较低剂量组下降明显(P＜0.01)，但夏荔芪高剂量组血清DHT含量与非那雄胺组差异无统计学意义(P＞0.05)，而前列腺组织中DHT含量稍高于非那雄胺组(P＜0.05)。
　　4、各组大鼠前列腺组织中PCNA及caspase-3表达情况
　　免疫组化结果显示，与空白组相比，模型组大鼠前列腺组织中PCNA表达明显增多，各治疗组与模型组相比，前列腺组织中PCNA表达均有明显降低，其中以阳性对照组下降较为明显。
　　免疫荧光结果显示，与空白组相比，模型组大鼠前列腺组织中caspase-3表达减少，而各治疗组与模型组相比，前列腺组织中caspase-3的表达亦明显增多，其中以阳性对照组增多较显著。
　　5、各组大鼠前列腺组织中bFGF表达水平
　　免疫荧光结果显示，与空白组相比，模型组大鼠前列腺组织bFGF表达明显增多，各治疗组与模型组相比，前列腺组织中bFGF表达均有明显减少，其中以阳性对照组减少较为明显。
　　6、各组大鼠血清及前列腺组织中SOD活性及MDA含量改变情况
　　实验结果显示，与空白组相比，模型组大鼠血清及前列腺组织中SOD活性[(116.05±6.06) U/L及(0.87±0.03) U/g vs.(248.80±6.49) U/L及(2.03±0.11) U/g]均显著降低，差异有统计学意义(P＜0.01);与模型组比较，各治疗组大鼠血清及前列腺组织中SOD活性明显增高，差异具有统计学意义(P＜0.01)，其中，以高剂量夏荔芪治疗组[(218.52±7.83) U/L及(1.67±0.05) U/g]升高最明显，低剂量夏荔芪组次之，非那雄胺组升高最不明显，各组间差异有统计学意义(P＜0.01或P＜0.05)。
　　与空白组比较，模型组大鼠血清及前列腺组织中MDA含量[(22.62±0.78)nmol/L及(231.08±9.40) pmol/g vs.(6.82±0.60) nmol/L及(99.73±5.97) pmol/g]显著增高，差异有统计学意义(P＜0.01);与模型组比较，各治疗组血清及前列腺组织中的MDA含量均有明显降低，差异具有统计学意义(P＜0.01);夏荔芪高、低剂量治疗组间MDA的表达水平逐渐递增，其中高剂量夏荔芪治疗组MDA[(11.40±0.51) nmol/L及(126.81±7.84) pmol/g]降低最明显，除低剂量夏荔芪组与非那雄胺组血清MDA含量之间差异无统计学意义外(P＞0.05)，余各组间差异均有统计学意义(P＜0.01或P＜0.05)。
　　结论：
　　1、采用去势后丙酸睾酮5 mg/kg·d皮下注射，连续注射4周后可成功诱导BPH大鼠模型;
　　2、夏荔芪胶囊可显著降低BPH大鼠前列腺湿重及前列腺指数;
　　3、夏荔芪胶囊能明显降低BPH大鼠血清及前列腺组织中DHT含量;
　　4、夏荔芪胶囊能抑制前列腺组织中PCNA的表达，提高caspase-3的表达，调节体内增殖/凋亡水平，改善组织增生状况;
　　5、夏荔芪胶囊能明显抑制前列腺组织bFGF的表达，减轻组织的增生情况。
　　6、夏荔芪胶囊能提高大鼠体内抗氧化物质SOD的活性，降低脂质过氧化产物MDA的水平，提高机体的抗氧化能力;
　　综上所述，夏荔芪胶囊能降低BPH大鼠的前列腺湿重及前列腺指数，通过下调DHT表达，调节组织增殖/凋亡（PCNA/caspase-3）蛋白含量，抑制bFGF的表达，调节体内氧化/抗氧化物质(MDA/SOD)的平衡，抑制血清及前列腺组织内炎症因子（IL-8、TNF-α）的表达等机制，起到治疗大鼠BPH的目的，可作为BPH药物治疗的一个新的选择。

目录

摘要

前言

第一章 夏荔芪胶囊对BPH大鼠前列腺组织形态学的影响

第一节 研究目的

第二节 实验材料与方法

第三节 实验结果

第二章 夏荔芪胶囊对BPH大鼠血清及前列腺DHT表达水平的影响

第一节 研究目的

第二节 实验材料与方法

第三节 实验结果

第三章 夏荔芪胶囊对BPH大鼠前列腺组织中PCNA及caspase-3表达水平的影响

第一节 研究目的

第二节 实验材料与方法

第三节 实验结果

第四章 夏荔芪胶囊对BPH大鼠前列腺bFGF表达水平的影响

第一节 研究目的

第二节 实验材料与方法

第三节 实验结果

第五章 夏荔芪胶囊对BPH大鼠血清及前列腺SOD、MDA表达水平的影响

第一节 研究目的

第二节 实验材料与方法

第三节 实验结果

第六章 夏荔芪胶囊对BPH大鼠血清及前列腺组织中IL-8、TNF-β含量的影响

第一节 研究目的

第二节 实验材料与方法

第三节 实验结果

第七章 讨论

第八章 全文小结

参考文献

中英文缩略词

综述 动物模型在中医药治疗良性前列腺增生

成果

致谢

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