前列腺素E2受体EPs在口腔鳞状细胞癌组织中的表达及意义

摘要

本实验拟阐明口腔鳞状细胞癌组织中EP受体的表达模式，为研究EP受体在口腔鳞癌发生发展过程中的作用奠定理论基础。
　　第一章 RT-PCR方法检测口腔鳞癌组织中EPs受体mRNA的表达
　　目的:检测口腔鳞状细胞癌组织中EP1、EP2、EP3、EP4受体mRNA的表达。
　　方法:收集2013年5月至2015年5月在南方医院口腔颌面外科行手术治疗的口腔鳞状细胞癌病例40例，所有患者术前均未进行过化学治疗、放射治疗或其他治疗，且无癌症家族史或其他并发症。所有病例均经术后常规HE染色证实为口腔鳞状细胞癌。获取40例口腔鳞癌标本及相应40例癌旁组织标本（距离鳞癌组织约2 cm，且术中切缘冰冻病理检查证实为癌细胞阴性）。将标本保存于RNA-later溶液中，并迅速置于液氮中保存。实验分为两组:(1)实验组:40例口腔鳞癌组织(2)对照组:40例癌旁组织。对EPs受体的表达进行Real-time PCR检测。设定癌旁组织中EPs受体mRNA的表达量为“1”，采用2-ΔΔCt方法检测口腔鳞癌组织中EPs受体mRNA的表达。所有实验均重复三次。β-actin作为内参照。
　　结果:实时定量PCR结果提示，与癌旁组织相比，鳞癌组织中EP1、EP2受体mRNA的表达量明显升高，EP1、EP2受体mRNA的相对平均表达量分别为1.442±0.4245、1.207±0.4259，经配对t检验，P值均＜0.05，差异均有统计学意义;与癌旁组织相比，EP3受体mRNA在口腔鳞癌组织中的表达明显降低，相对平均表达量为0.4455±0.3292，经配对t检验，P＜0.05，差异有统计学意义;与癌旁组织相比，EP4受体mRNA的表达在口腔鳞癌组织中的表达升高，相对平均表达量为1.147±0.4965，经配对t检验，P＞0.05，差异无统计学意义。
　　结论:EP1、EP2受体mRNA的表达显著上调，EP3受体mRNA的表达显著下调，EPs受体mRNA在口腔鳞状细胞癌组织中的异常表达，可能在口腔鳞状细胞癌的发生发展过程中扮演了重要角色。
　　第二章 免疫组织化学染色方法检测口腔鳞癌组织中EPs受体蛋白的表达
　　目的:检测口腔鳞状细胞癌组织中EP1、EP2、EP3、EP4受体蛋白的表达。
　　方法:收集2013年5月至2015年5月在南方医院口腔颌面外科行手术治疗的口腔鳞状细胞癌病例40例，所有患者术前均未进行过化学治疗、放射治疗或其他治疗，且无癌症家族史或其他并发症。所有病例均经术后常规HE染色证实为口腔鳞状细胞癌。获取40例口腔鳞癌标本及相应40例癌旁组织标本（距离鳞癌组织约2 cm，且术中切缘冰冻病理检查证实为癌细胞阴性）。标本获取后立即放于福尔马林溶液中常温保存。实验分为两组:(1)实验组:40例口腔鳞癌组织(2)对照组:40例癌旁组织。对EPs受体蛋白的表达进行免疫组织化学染色。PBS溶液代替一抗作为阴性对照，已知阳性切片作为阳性对照。使用染色强度和阳性细胞数对染色结果进行半定量。
　　结果:EP1受体在大部分癌旁组织中呈弱阳性表达，而在大部分口腔鳞癌组织中呈中等阳性表达，经Wilcoxon符号秩和检验，T=55，P＜0.05，差异有统计学意义，口腔鳞癌组织中EP1受体蛋白的表达明显升高。EP2受体在大部分癌旁组织中呈弱阳性表达，而在大部分口腔鳞癌组织中呈中等阳性表达，经Wilcoxon符号秩和检验，T=91，P＜0.05，差异有统计学意义，口腔鳞癌组织中EP2受体蛋白的表达明显升高。EP3受体在大部分癌旁组织中呈中等阳性表达，而在大部分口腔鳞癌组织中呈弱阳性表达，经Wilcoxon符号秩和检验，T=-114，P＜0.05，差异有统计学意义，口腔鳞癌组织中EP3受体蛋白的表达明显降低。EP4受体蛋白在大部分癌旁组织及口腔鳞癌组织中均呈中等阳性表达，经Wilcoxon符号秩和检验，T=14，P＞0.05，差异无统计学意义。
　　结论:EP1、EP2受体蛋白的表达显著上调，EP3受体蛋白的表达显著下调，EPs受体蛋白在口腔鳞状细胞癌组织中的异常表达，可能在口腔鳞状细胞癌的发生发展过程中扮演了重要角色。
　　第三章 酶联免疫吸附实验测定口腔鳞癌组织中花生四烯酸的表达
　　目的:检测口腔鳞状细胞癌组织中花生四烯酸的表达。
　　方法:收集2013年5月至2015年5月在南方医院口腔颌面外科行手术治疗的口腔鳞状细胞癌病例40例，所有患者术前均未进行过化学治疗、放射治疗或其他治疗，且无癌症家族史或其他并发症。所有病例均经术后常规HE染色证实为口腔鳞状细胞癌。获取40例口腔鳞癌标本及相应的40例癌旁组织标本（距离鳞癌组织约2 cm，且术中切缘冰冻病理检查证实为癌细胞阴性）。标本获取后立即存放于-80度冰箱备用。实验分为两组:(1)实验组:40例口腔鳞癌组织(2)对照组:40例癌旁组织。对花生四烯酸的表达进行酶联免疫吸附实验。
　　结果:与癌旁组织相比，花生四烯酸在口腔鳞状细胞癌组织中的表达明显升高，40例口腔鳞癌组织中花生四烯酸的平均质量分数为477.4±39.84 pg/g，40例癌旁组织中花生四烯酸的平均质量分数为38.4±4.92 pg/g，经配对t检验，P＜0.05，差异有统计学意义。
　　结论:花生四烯酸在口腔鳞癌组织中的表达显著上调，说明该条信号通路在口腔鳞癌发生发展过程中可能扮演了重要角色。
　　总之，与癌旁组织相比，EP1、EP2受体在口腔鳞癌组织中表达升高，EP3受体在口腔鳞癌组织中表达降低，花生四烯酸在口腔鳞癌组织中表达显著上调，EP受体的异常表达及花生四烯酸的高表达可能与口腔鳞状细胞癌的发生、发展密切相关。

目录

摘要

前言

第一章 RT-PCR方法检测口腔鳞癌组织中EPs受体mRNA的表达

1 材料与方法

2 结果

3 讨论

第二章 免疫组织化学染色方法检测口腔鳞癌组织中EPs受体蛋白的表达

1 材料与方法

2 结果

3 讨论

第三章 酶联免疫吸附实验测定口腔鳞癌组织中花生四烯酸的表达

1 材料与方法

2 结果

3 讨论

全文总结

参考文献

中英文对照缩略词表

硕士学位期间成果

致谢

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