CYP3A4、CYP3A5、MDR1和PXR基因多态性与五酯胶囊对他克莫司增效作用的相关性研究

摘要

目的：
　　他克莫司(tacrolimus，FK506)由于疗效确切、副作用少，目前正逐渐成为临床首选的的免疫抑制剂。课题组在国内外首次发现五酯胶囊(WZC)能显著性提高他克莫司血药浓度。大量的研究均证实CYP3A5*3基因型与他克莫司血药浓度强烈相关。对于CYP3A4*18B、MDR1、PXR的基因多态性对他克莫司药动学的影响，目前研究意见并不一致。有很多体外实验证实了WZC是通过抑制CYP3A和P-gp来提高他克莫司C0。然而WZC与他克莫司的相互作用是否与CYP3A、MDR1、PXR等基因多态性相关，目前尚未见深入报道。本论文在肾移植患者中回顾性研究CYP3A、MDR1和PXR基因多态性与WZC对他克莫司增效作用的相关性。
　　方法：
　　连续服用五酯胶囊36个月的患者74人为WZC(+)组，未服用五酯胶囊的患者96人为WZC（-）组。对于CYP3A4*18B、CYP3A5*3、MDR11236C＞T、MDR12677G＞T/A、MDR13435C＞T基因型，使用的检测方法为聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)法;通过直接测序法测定PXR7635A＞G(rs6785049)和PXR24381A＞C(rs1523127)基因多态性;通过ASPCR(Allelic Special-Touch Down PCR，特异性等位基因聚合酶链反应)方法测定PXR6碱基缺失(rs3842689)基因型。他克莫司C0的检测方法使用化学发光微粒子免疫分析技术(Chemiluminescence Microparticle Immuno Assay,CMIA)。
　　采用SPSS20.0软件分析统计数据。通过Kolmogorov-Smirnov方法来进行正态性检验。以(x)±s表示符合正态分布的计量资料;采用两独立样本t检验进行两组间比较。以中位数(P25，P75)表示非正态分布的计量资料;采用Mann-Whitney U检验进行两组之间的比较。以率表示计数资料;采用x2检验或者Fisher确切性检验进行两组之间的比较。采用协方差分析考察组间他克莫司C0/D的差异，以用药0个月时他克莫司C0/D和红细胞计数(RBC)作为协变量。分析各因素与他克莫司C0/D的相关性采用Spearman's correlation方法。
　　结果：
　　协方差分析时，研究期间WZC(+)组他克莫司C0/D显著高于WZC（-）组(P＜0.001)。对于CYP3A5*3基因型，用药1个月时，WZC(+)组GG基因型患者他克莫司C0/D值显著高于WZC（-）组同基因型患者(P=0.022)，用药3个月～3年时无明显差异(P＞0.05);用药1个月～3年时，WZC(+)组患者GA/AA基因型他克莫司C0/D值显著高于WZC（-）组同基因型患者(P＜0.001)。对于PXR7635G＞A基因型，在WZC(+)组中，用药3个月～2年时，GG型患者他克莫司C0/D均显著高于GA/AA型(P＜0.05);单独使用他克莫司时，PXR7635G＞A基因多态性对他克莫司C0/D无明显影响。用药1个月～3年，CYP3A4*18B、MDR11236C＞T、MDR12677G＞T/A、MDR13435C＞T、PXR6碱基缺失、PXR24381A＞C不同基因型患者他克莫司C0/D无显著性差异。
　　采用Sperman's correlation分别分析各因素与他克莫司血药浓度/剂量(C0/D)值间的相关性，在WZC（-）组中，性别、CYP3A4*18B、CYP3A5*3、MDR12677G＞T/A、ALT、RBC、Hb与他克莫司C0/D相关;在WZC(+)组中，与他克莫司C0/D相关的因素只有PXR7635G＞A。
　　结论：
　　1、WZC能显著性提高CYP3A5*3GA/AA型患者他克莫司C0/D，而对CYP3A5*3GG型患者没有显著影响。
　　2、合并使用WZC时，PXR7635G＞A突变与他克莫司C0/D降低有关;
　　3、合并使用WZC时，CYP3A4*18B、MDR11236C＞T、MDR12677G＞T/A、MDR13435C＞T、PXR6碱基缺失、PXR24381A＞C基因多态性与他克莫司C0/D无相关性。

目录

摘要

前言

第一章 五酯胶囊对他克莫司C0／D的影响

1．1 引言

1．2 研究对象

1．3 研究方法

1．3．1 治疗方法

1．3．2 观察指标

1．3．3 他克莫司血药浓度的测定

1．3．4 统计学方法

1．4 实验结果

1．4．1 肾移植患者临床资料比较

1．4．2 五酯胶囊对他克莫司C0／D的影响

1．4．3 患者肝、肾功能比较

1．5 讨论

第二章 CYP3A基因多态性与五酯胶囊对他克莫司增效作用的相关性研究

2．1 引言

2．2 研究对象与材料

2．2．1 研究对象

2．2．2 仪器

2．2．3 试剂

2．3 实验方法

2．3．1 相应试剂的配制

2．3．2 DNA的提取与测定

2．3．3 琼脂糖凝胶电泳实验方法

2．3．4 他克莫司血药浓度测定

2．3．5 CYP3A4*18B和CYP3A5*3基因多态性检测

2．3．6 统计学分析

2．4 实验结果

2．4．1 CYP3A4*18B基因多态性与五酯胶囊对他克莫司增效作用的相关性

2．4．2 CYP3A5*3基因多态性与五酯胶囊对他克莫司增效作用的相关性

2．4．3 CYP3A4*18B-CYP3A5*3单倍型基因型对他克莫司C0／D的影响

2．5 讨论

第三章 MDR1基因多态性与五酯胶囊对他克莫司增效作用的相关性研究

3．1 引言

3．3．2 MDR1 2677G>T／A的基因型检测

3．3．3 MDR1 3435C>T的基因型检测

3．3．4 统计学分析

3．4 实验结果

3．4．1 MDR1 1236C>T基因多态性与五酯胶囊对他克莫司增效作用的相关性

3．4．2 MDR1 2677G>T／A基因多态性与五酯胶囊对他克莫司增效作用的相关性

3．4．3 MDR1 3435C>T基因多态性与五酯胶囊对他克莫司增效作用的相关性

3．4．4 MDR1单倍型对他克莫司C0／D的影响

3．5 讨论

第四章 PXR基因多态性与五酯胶囊对他克莫司增效作用的相关性研究

4．1 引言

4．2 研究对象

4．3 实验方法

4．3．1 PXR 6碱基缺失的基因型检测

4．3．2 PXR 7635A>G的基因型检测

4．3．3 PXR 24381A>C的基因型检测

4．3．4 统计学分析

4．4 实验结果

4．4．1 PXR 6碱基缺失基因多态性与五酯胶囊对他克莫司增效作用的相关性

4．4．2 PXR 7635G>A基因多态性与五酯胶囊对他克莫司增效作用的相关性

4．4．3 PXR 24381A>C基因多态性与五酯胶囊对他克莫司增效作用的相关性

4．4．4 PXR单倍型对他克莫司C0／D的影响

4．5 讨论

第五章 相关因素与五酯胶囊联合他克莫司个体化用药的关系

5．1 引言

5．2 研究对象

5．3 实验方法

5．4 实验结果

6．5 讨论

第六章 全文总结

6．1 全文结论

6．2 创新性

6．3 存在的问题与展望

参考文献

综述 五味子与其他药物相互作用的机制研究进展

中英文缩略词表

攻读学位期间的研究成果

致谢

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