TSA对伯基特淋巴瘤细胞生物学活性的影响及机制研究

摘要

伯基特淋巴瘤(Burkitt's lymphoma,BL)是一种高度侵袭性B细胞非霍奇金淋巴瘤,目前治疗方法主要是化疗、放疗、单克隆抗体等,但复发和耐药未有效改善,对具预后不良特征或复发的患者仍需生物学靶向治疗。
　　表皮生长因子受体通路底物8(EPS8),是多种酪氨酸激酶的磷酸化底物,参与多种信号转导,促进肿瘤发生、发展和转移,被认为是预后不良的标志物,但EPS8在淋巴瘤中的研究尚无报道。
　　组蛋白乙酰化和去乙酰化保持平衡,以维持细胞正常功能,乙酰化功能失调可致调节细胞周期、分化、凋亡相关基因转录失调。组蛋白去乙酰化酶抑制剂(HDACi)可影响基因转录、增加肿瘤抑制基因表达,导致细胞周期停滞、分化和凋亡。曲古抑菌素A(TSA)是最有效的HDACi之一,但在淋巴瘤中研究尚少,且与EPS8在伯基特淋巴瘤的作用之间是否存在关联,均无文献报道。
　　本研究拟从体内和体外实验探索TSA对伯基特淋巴瘤细胞生物学活性的作用,EPS8对TSA发挥抗肿瘤作用的影响及TSA联合化疗药物的效果,并探索TSA的作用机制,为伯基特淋巴瘤的治疗提供新方向。
　　目的：
　　1.探讨TSA对细胞生物学功能的影响及作用机制。
　　2.构建稳定过表达和低表达EPS8的Ramos和Namalwa细胞株。
　　3.探讨TSA与表阿霉素联合作用对细胞的影响。
　　4.探讨TSA和EPS8对裸鼠伯基特淋巴瘤移植瘤的作用。
　　方法：
　　1.MTT检测细胞对TSA的敏感性,流式细胞术检测TSA对细胞周期和凋亡的影响,Western blot检测目的蛋白的表达。
　　2.构建稳定过表达和沉默EPS8及对照细胞系,台盼蓝拒染法检测细胞增殖水平,MTT检测EPS8的表达对细胞药物敏感性的影响,Western Blot检测EPS8及下游蛋白表达。
　　3.MTT检测TSA和表阿霉素单独及联合后细胞活性,Western blot检测EPS8及下游通路活性。
　　4.采用Namalwa-scramble和Namalwa-shRNA-EPS8细胞建立伯基特淋巴瘤动物模型。
　　结果：
　　1.TSA对细胞的作用呈时间浓度依赖性。与对照组比,不同浓度TSA对细胞G0/G1、S及G2/M期的影响有显著性差异。随TSA浓度增加,两种细胞的凋亡率增高。
　　2.Westem Blot示TSA作用后,EPS8、Phospho-Erk1/2通路相关蛋白、Bcl2和cyclinD1表达下降。
　　3.沉默EPS8抑制细胞增殖,降低Phospho-Erk1/2通路活性,过表达EPS8则相反。沉默EPS8与TSA具协同效应,过表达EPS8则减弱TSA的作用。
　　4.TSA与表阿霉素联合对细胞活性、EPS8及Phospho-Erk1/2通路的抑制更明显。
　　5.在体内实验,Namalwa-shRNA-EPS8+TSA组的瘤体最小,各组小鼠体重无统计学差异。
　　结论：
　　1.TSA抑制细胞增殖,促进周期停滞及凋亡,可通过EPS8及下游Phospho-Erk1/2通路发挥作用。
　　2.沉默EPS8抑制细胞增殖,降低Phospho-Erk1/2通路活性,与TSA具有协同效应。过表达EPS8则相反,且可减弱TSA的抑制作用。
　　3.TSA可增强伯基特淋巴瘤对化疗药物的敏感性。
　　4.在动物水平,沉默EPS8联合TSA可明显抑制瘤体生长。

目录

摘要

前言

参考文献

第一章 TSA对伯基特淋巴瘤细胞的生物学功能的影响

1．材料

2．方法

3．结果

4．讨论

参考文献

第二章 TSA对伯基特淋巴瘤细胞作用的分子机制，及与EPS8之间的关系

1．材料

2．方法

3．结果

4．讨论

参考文献

第三章 TSA和EPS8对伯基特淋巴瘤动物模型体内治疗作用研究

1．材料

2．方法

3．结果

4．讨论

参考文献

全文小结

中英文缩略词对照表

攻读学位期间发表论文

致谢

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