四甲基吡嗪在蛛网膜下腔出血后早期脑损伤中的神经保护作用临床与基础研究

摘要

背景与目的：颅内动脉瘤破裂引起的蛛网膜下腔出血(subarachnoid hemorrhage，SAH)是神经科临床常见的危急重症。本病致残致死率甚高。早期脑损伤(early brain injury，EBI)覆盖了从初次出血到血管痉挛发生前脑组织的一系列改变，是影响SAH预后的主要原因。EBI的病理生理机制十分复杂，涉及SAH后的血脑屏障破坏、脑水肿、颅内压增高、脑血流及灌注压下降，以及氧自由基释放、氧化应激、炎症反应、线粒体损伤、神经细胞坏死和凋亡等多种病理改变，且不同的机制之间存在复杂的相互作用。虽然SAH的诊断及治疗技术已有长足进展，但其疗效仍难以令人满意。因此，针对EBI进行深入研究，并寻找能有效干预其机制和抑制进展的药物，具有十分重要的现实意义。四甲基吡嗪(Tetramethylpyrazine，TMP)是从伞形科藁本属植物川芎的有效成分之一，已在脑缺血模型中被证实具有清除氧自由基、稳定线粒体、减少胞间钙流、调节凋亡相关蛋白的表达而并抑制细胞凋亡等诸多作用。但目前关于其治疗SAH的研究所见较少。本课题拟通过临床资料回顾及基础实验，对TMP在SAH后EBI过程中的神经保护作用进行研究。
　　方法：本课题通过临床资料回顾，分析影响动脉瘤性蛛网膜下腔出血患者预后的危险因素;再使用TMP对大鼠视交叉前池注血法构建的SAH模型进行后处理干预，对大鼠进行死亡率计算、蛛网膜下腔出血评分、神经功能评分、脑组织含水量计算;通过测定线粒体钙离子浓度、线粒体活性氧含量、线粒体膜电位、观察线粒体结构变化情况，评价TMP对SAH后线粒体的保护作用;通过Western blotting、免疫荧光染色，分析TMP对SAH后线粒体凋亡通路相关蛋白表达以及神经细胞凋亡的影响。
　　结果：通过临床资料回顾发现，高血压病史、糖尿病病史、入院Hunt-Hess高分级、未使用TMP是SAH患者预后不良密切相关。与对照组相比，应用TMP对大鼠SAH模型进行后处理干预，能有效降低死亡率，显著改善幸存大鼠的神经功能损害，减轻早期脑水肿程度。TMP并可以显著减轻大鼠SAH后24小时的神经细胞线粒体钙超载，减少活性氧生成，稳定膜电位，保护其超微结构，并降低胞浆cyt c和Smac的含量，上调bcl-2的水平，共同抑制胞浆claved-caspase-3的表达以及神经细胞凋亡。
　　结论：本课题通过回顾分析发现TMP的使用对SAH患者的预后有积极作用。实验研究表明，TMP通过改善SAH造成线粒体钙超载，减少线粒体活性氧的生成，稳定线粒体膜电位，发挥其线粒体保护作用;通过降低线粒体相关凋亡蛋白的含量，上调胞浆抗凋亡蛋白的水平，共同抑制了线粒体凋亡通路的激活，减少了神经细胞的凋亡，从而发挥其在SAH后EBI过程中的神经保护作用。本研究初步探索了TMP通过抑制线粒体凋亡通路以改善SAH预后这一可能的机制。

目录

摘要

第一章 绪论

第一节 蛛网膜下腔出血后早期脑损伤研究进展

第二节 盐酸四甲基吡嗪的药理机制及临床应用研究进展

参考文献

第二章 盐酸四甲基吡嗪在动脉瘤性蛛网膜下腔出血患者中的神经保护作用

引言

一、材料和方法

二、结果

三、讨论

四、结论

参考文献

第三章 盐酸四甲基吡嗪在大鼠实验性蛛网膜下腔出血后早期脑损伤的神经保护作用

引言

一、材料和方法

二、结果

三、讨论

四、结论

参考文献

第四章 盐酸四甲基吡嗪对大鼠实验性蛛网膜下腔出血后线粒体损伤的保护作用

引言

一、材料和方法

二、结果

三、讨论

四、结论

参考文献

第五章 盐酸四甲基吡嗪对大鼠实验性蛛网膜下腔出血后神经细胞凋亡的保护作用

引言

一、材料和方法

二、结果

三、讨论

四、结论

参考文献

全文总结

附录：文献综述

攻读博士学位期间科研成果

致谢

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