人肝癌HepG2不同转移潜能异质性细胞亚系的分离鉴定

摘要

目的：从人肝癌细胞株HepG2母系分离克隆异质性亚系,探讨肝癌异质性机理。
　　方法：(1)应用有限稀释法对人肝癌细胞株HepG2进行单细胞克隆化培养,分离异质性亚系；(2)用倒置相差显微镜,透射电镜、扫描电镜观察分离获得细胞亚系的形态特征；(3)应用细胞计数法检测、流式细胞仪检测其体外增殖能力、细胞周期和DNA含量的差异；(4)应用琼脂糖移动实验观察其体外运动能力差异；(5)应用裸鼠皮下种植和脾种植肝转移实验模型探讨其体内成瘤能力和转移潜能的差异。
　　结果：(1)从HepG2中分离出HepG2-D3及HepG2-F4两个异质性细胞亚系；(2)HepG2-F4亚系细胞体积较大呈长梭形,细胞表面光滑,微绒毛少,胞浆内含许多肿胀变形的线粒体；HepG2-D3亚系细胞呈多角形、多突起,细胞表面微绒毛丰富,并形成伪足,细胞溶酶体较多；(3)HepG2-F4体外倍增时间18h,最大增生倍数16.7,而HepG2-D3体外倍增时间为26h,最大增生倍数为12.6；HepG2-F4增殖周期(S+G2M)百分率为53.7%,高于HepG2-D3的37.6%；(4)HepG2-D3体外移动能力明显高于HepG2-F4(p<0.01)；(5)HepG2-F4皮下种植能成瘤(3/3),但脾脏内种植后不成瘤,不转移(0/10)；HepG2-D3皮下种植能成瘤(3/3),脾脏内种植成瘤率高(100%),并在肝脏形成广泛转移(10/10)。
　　结论：(1)从人肝癌细胞株HepG2母系成功分离建立两个转移潜能不同的细胞亚系HepG2-D3和HepG2-F4,为进一步研究肝癌异质性尤其是转移的确切机制提供了良好素材；(2)HepG2-D3及HepG2-F4在形态学、体外增殖和运动能力等方面差异明显；(3)脾内种植肝转移模型可用于筛选高转移潜能肝癌细胞；

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