亚砷酸对肝癌细胞BEL-7402分化诱导及机制的研究

摘要

目的：研究亚砷酸(As2O3)是否有诱导肝癌细胞分化的作用并探讨其可能机制,为亚砷酸作为新的诱导分化剂用于肝癌治疗提供科学的实验依据。
　　方法：体外培养肝癌BEL-7402细胞,用Giemsa染色法观察肝癌细胞的分化形态特点；比色法测定酪氨酸-α-酮戊二酸转氨酶(tyrosine aminotransferase,TAT)活性、γ-谷氨酰转肽酶(γ-glutamyl transpeptidase,γ-GT)活性、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性、以及用放免法测定甲胎蛋白(α-fetoprotein,AFP)分泌量,观察肝癌细胞分化过程的生化变化；制作生长曲线,观察瘤细胞的生长特点；使用软琼脂集落形成实验评价肝癌细胞的恶性程度；通过RT-PCR反映肝细胞核因子4 alpha(hepatocyte nuclear factor 4α,HNF 4α)mRNA表达的变化探讨肝癌细胞分化的可能分子机制。
　　结果：在>0.25 μmol/L的亚砷酸作用5d后,肝癌BEL-7402细胞变小、变圆,核变小、居中、变圆或卵圆形态,切迹几乎消失,核/浆比例缩小,核仁变少、变淡或不明显；各给药组细胞的AFP随着给药时间的延长和给药剂量的增大而下降,呈一定的剂量-效应依赖关系。第二天以后各个组的AFP分泌量都较对照组低,并具有统计学意义(P<；0.01)。0.5 μmol/L和1.0 μmol/L组的AFP分泌量减少最明显且在第六天达到最低。γ-GT的比活性随着各给药组时间的延长而下降,并随给药剂量的增大而下降程度更大,呈一定的剂量-效应依赖关系。0.5μmol/L和1.0 μmol/L组的γ-GT的比活性减少最明显。TAT随着各给药组时间的延长而上升,并随给药剂量增大而上升程度更大,培养第4天,0.25 μmol/L浓度的亚砷酸组TAT的比活性较对照组高(P<0.05),0.5 μmol/L、1 μmol/L浓度的亚砷酸组TAT的比活性较对照组更高(P<0.01),以后各天给药组均高于对照组(P<0.01)。各组在第3~4天之间ALP的比活性变化最明显,尔后缓慢升高。对照组、0.06 μmol/L组、0.12 μmol/L组、0.25μmol/L组的ALP比活性都在第七天达到最高,而0.5 μmol/L和1 μmol/L组ALP比活性在第4天达到最高值(P<0.01)。0.06、0.12 μmol/L的亚砷酸对BEL-7402细胞的生长抑制不明显,与未加药组相似,而0.25、0.5、1.0 μmol/L的亚砷酸对细胞的抑制作用较为明显并呈一定的剂量-效应关系。与对照组相比,0.5、1.0 μmol/L的亚砷酸对细胞的亚砷酸对肝癌细胞BEL一7402分化诱导及机制的研究集落形成百分率与对照组相比抑制作用明显(尸<；0.05)。随着给药浓度的增加,目的基因HNF 4a与内参照基因p一actin光密度比值也逐渐增高,0.5、1.0卜mo比亚砷酸处理组与对照组相比具有显著差异〔尸<；0 .01)。
　　结论：低剂量的AsZO3(0.25、0.5林mol/L)具有明显的诱导肝癌细胞株BEL一7402分化作用,HNF4a可能在亚砷酸诱导BEL一7402细胞分化过程中起着关键的调节作用。

目录

中文摘要

Abstract

前言

肿瘤的细胞生物学特点

诱导分化疗法

分化诱导剂

肝癌的诱导分化疗法

砷剂

研究方案的制定

实验部分

材料与方法

实验材料

实验方法

实验结果

亚砷酸对肝癌BEL-7402细胞的形态影响

亚砷酸对肝癌BEL-7402细胞的生物化学特性的影响

亚砷酸对肝癌Bel-7402细胞的生长和集落形成百分率的影响

亚砷酸对肝癌Bel-7402细胞HNF4α mRNA表达的影响

讨论

亚砷酸对肝癌BEL-7402细胞的诱导分化作用

HNF4α在肝癌的发生、发展中的作用

亚砷酸作为分化诱导剂的剂量-时间-效应关系

结论

参考文献

英文缩略语

在校期间发表的文章

致谢