人源脐血CD34+HSCs的分离和脐带hUC-MSCs的生物学特性研究

摘要

一、目的
　　1.建立从人脐带中分离间充质干细胞的方法。
　　2.培养脐带间充质干细胞,研究其相关生物学特性。
　　3.建立从脐带血中分离造血干细胞的方法。
　　二、方法
　　1.用灭菌瓶采集新生儿脐带,采用组织块分离培养法分离培养间充质干细胞。
　　2.取第3-5代细胞进行相关生物学特性分析:生长曲线分析;细胞周期;流式鉴定细胞表面标记;成骨,成脂诱导。
　　3.无菌采集新生儿脐带血;采用免疫磁珠吸附法从脐带血中分离造血干细胞。
　　三、结果
　　1.成功分离出呈典型梭形纤维状生长,生长集落后成旋涡状的间充质干细胞;
　　2.细胞生长曲线图示,说明细胞生长速度快,增殖能力强,符合间充质干细胞增长特点;
　　3.周期检测表明分离的间充质干细胞处于G0/G1期的细胞占93.29％,处于G2/M期的细胞占5.26%,S期细胞占1.45%;说明大多数细胞处于静息期,保留了自我更新和分离能力,符合干细胞特性;
　　4.流式检测细胞表面抗原标志物,CD29、CD105强表达;阴性表达CD34、HLA-DR;
　　5.获得的间充质干细胞成骨诱导后,被茜素红染色,显示有钙结节形成;成脂诱导后,油红O染色,显示有脂肪滴形成,说明成骨成脂诱导成功;
　　6.流式细胞仪检测免疫磁珠过磁架分离脐血中CD34造血干细胞占88.3%,未过磁架分离的占2.6%;
　　四、结论
　　本实验室通过无菌组织块分离法分离出的细胞,以细胞形态学观察、绘制细胞生长曲线、细胞周期、流式免疫鉴定、成骨成脂鉴定的生物学方法,确认为间充质干细胞;通过免疫磁珠吸附法可以成功分离出高纯度的CD34+造血干细胞。

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第一章 前言

1.1脐带间充质干细胞(hUC-MSCs)的概述

1.2 hUC-MSCs 的组织工程及临床应用

1.3 hUC-MSCs的表面抗原标记

1.4 hUC-MSCs总结

1.5 造血干细胞（HSCs）简介

1.6 CD34分子表面标记

1.7免疫磁珠分选技术

第二章 脐带间充质干细胞的分离及生物学特性

2.1 实验材料

2.2 实验方法

2.3 结果

2.4 讨论

第三章 脐血造血干细胞的分离

3.1 实验材料

3．2 实验方法

3.3 结果

3.4 讨论

参考文献

在学期间发表论文

致谢