白芍总苷对系统性红斑狼疮患者外周血B细胞内TLR9表达和IFN-α分泌的影响

摘要

目的：了解白芍总苷对系统性红斑狼疮（SLE）患者和正常健康人外周血单个核细胞中B淋巴细胞内TLR9的表达及IFN-α分泌的影响，探讨白芍总苷在SLE治疗上的作用机制，为白芍总苷的合理用药提供理论依据。
　　方法：选取SLE患者60例和正常健康人20例，抽取外周静脉血约20ml.，分离外周血单个核细胞，分为5组体外培养，空白对照组加入RPMI-1640，实验组分别加入刺激性CpG-ODN、白芍总苷、刺激性CpG-ODN和白芍总苷、刺激性和抑制性-ODN，共同培养48小时后提取细胞及培养上清液，应用流式细胞仪检测培养后各组外周血 CD19+B淋巴细胞内 TLR9表达，用ELISA方法检测PBMC培养上清中IFN-α的浓度，分别比较各组之间TLR9的表达及IFN-α的分泌有无差异。
　　结果：1各组TLR9表达情况：应用流式细胞仪对60例SLE患者及20例正常健康人的PBMC中CD19+B淋巴细胞内TLR9+细胞的测定结果显示：①在正常健康人中，刺激组（CPG-ODN，下同）9.10±2.12（％）高于空白对照组4.96±2.11（%），抑制组（CPG-ODN加抑制性 ODN，下同）6.27±1.77（%）低于刺激组，差异均有统计学意义（p=0.002, p=0.012）；抑制组高于空白对照组，但两者无统计学意义（p=0.200）；刺激剂加白芍总苷组6.98±2.10（%）低于刺激组，高于抑制组，但两者均无统计学意义（p=0.064；p=0.481）；白芍总苷组5.43±1.60（%）与空白对照组无明显差异（p=0.627）；平均荧光强度（MFI）：刺激组高于空白对照组，差异有统计学意义（p=0.048），抑制组高于空白对照组，差异有统计学意义（p=0.002），抑制组略高于刺激组，但差异无统计学意义（p=0.304）；刺激剂加白芍总苷组与刺激组及抑制组相比均无明显差异(p>0.05)，白芍总苷组与空白对照组比较亦无明显差异（p>0.05）。②在SLE患者中，刺激组14.86±3.42（%）高于空白对照组9.20±3.43（%），抑制组10.73±3.98（%）低于刺激组，差异均有统计学意义（p<0.001, p=0.007）；抑制组高于空白对照组，但两者无统计学意义（p=0.286）；刺激剂加白芍总苷组11.95±3.63（%）低于刺激组，差异有统计学意义（p=0.038），高于抑制组，但两者无统计学意义（p=0.402◇）；白芍总苷组9.47±3.34（%）与空白对照组无明显差异（p=0.831）；而平均荧光强度（MFI）各组间均没有明显差异；③将 SLE患者组按 SLEDAI评分分为轻度活动组与中重度活动组，中重度活动组所得的结果与②一致，轻度活动组中，刺激剂加白芍总苷组低于刺激组，高于抑制组，但两者均无统计学意义（p=0.203，p=0.255），其余结果与②一致。
　　2. IFN-α的分泌情况：各组体外培养后IFN-α的分泌情况为：①在正常健康人中：刺激组4.72±0.64（μg/ml）高于空白对照组1.42±0.21（μg/ml），抑制组1.64±0.22（μg/ml）低于刺激组，差异均有统计学意义(p<0.001， p<0.001)；抑制组高于空白对照组，但两者差异无统计学意义（p=0.164），刺激剂加白芍组1.91±0.18（μg/ml）低于刺激组，差异有统计学意义(p<0.001)，高于抑制组，但差异无统计学意义（p=0.067），白芍总苷组1.14±0.17（μg/ml）低于空白对照组，差异有统计学意义（p=0.048）；②在SLE患者中，刺激组6.98±0.21（μg/ml）高于空白对照组4.83±0.53（μg/ml），抑制组5.04±0.50（μg/ml）低于刺激组，差异均有统计学意义（p<0.001， p<0.001）；虽抑制组高于空白对照组，但两者差异无统计学意义（p=0.294），刺激剂加白芍组5.21±0.47（μg/ml）低于刺激组，差异有统计学意义(p<0.001)，高于抑制组，但差异无统计学意义（p=0.353），白芍总苷组1.14±0.17（μg/ml）低于空白对照组，差异有统计学意义（p=0.004）。③将SLE患者组按SLEDAI评分分为轻度活动组与中重度活动组，所得的结果与②一致。
　　结论：在SLE患者和正常人体外研究中，刺激性CpG-ODN可以使PBMC中B淋巴细胞内TLR9的表达上调及细胞中IFN-α的分泌增加，而抑制性-ODN则可以通过抑制细胞内TLR9的表达而阻断CpG-ODN的这种免疫刺激作用。白芍总苷可以减弱 CpG-ODN对 TLR9的表达上调作用，并减少其下游产物 IFN-α的分泌。提示细菌或病毒中所含的具有免疫刺激性 DNA在 SLE的发病过程中可能起着重要的作用，TLR9是一个潜在的免疫干预治疗靶点，深入研究抑制性-ODN可以有望使之成为一种新型的治疗手段应用于SLE的治疗。

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1. 引言

2. 材料和方法

2.1 实验材料

2.2 实验方法

2.3 统计处理

3. 实验结果

3.1 TLR9在B淋巴细胞内的表达结果

3.2 PBMC体外培养后上清液中IFN-α含量的检测结果

3.3 培养上清IFN-α水平与B淋巴细胞内TLR9表达的相关性分析

4. 讨 论

5. 结 论

参考文献

致谢

附录A英中文术语缩略语对照表

附录B常用试剂配制

附录C 综述： 166例ANA阳性者血清线性免疫ANA谱的结果分析