重金属镉暴露在雌性生殖方面的分子调控探索

摘要

胚胎着床是指具有着床能力的胚胎在接受态子宫中完成定位、黏附、侵入的一个正常生理过程。蜕膜化是指子宫基质细胞为胚胎的着床进行一系列的增殖分化。胚胎着床和子宫的蜕膜化是很复杂的生理现象，需要很多的基因、细胞因子、生长因子等参与调节，同时也是早期妊娠成功的一个关键步骤。镉(Cd)是一种自然界中广泛存在的工业废料污染物，可以对生物机体产生毒性和致癌作用。已有文章报道，镉具有环境雌激素样作用。
　　本实验将用广泛使用的一种镉盐氯化镉（Cadmium chloride，CdCl2）作为实验模拟自然界镉污染。本实验的目的是为了探究镉暴露对于子宫接受态和蜕膜化有无影响。采用人接受态子宫的腔上皮细胞系ECC1细胞和腺上皮细胞系Ishikawa细胞，分析镉对子宫上皮细胞系接收态相关基因的影响。分别用0.1μM和1μM两个浓度CdCl2处理ECC1细胞；1μM和10μM两个浓度CdCl2处理Ishikawa细胞。另外本实验分别用0.01μM、0.1μM、1μM三个浓度处理人子宫内膜基质细胞系4003细胞探讨镉对子宫内膜基质细胞蜕膜化的影响。除体外细胞培养探讨镉对生殖的影响外，本实验还用CD-1小鼠建立延迟与激活胚胎着床模型探究镉是否能够激活胚胎的着床。小鼠妊娠第4天切除卵巢，接下来连续3天皮下注射孕酮维持胚胎着床能力，在小鼠妊娠第7天注射孕酮的同时，再分别0.5mg/kg、2.5mg/kg剂量CdC12腹腔注射，24h后取出小鼠子宫。通过Western-blot方法半定量检测子宫接受态相关分子变化趋势；通过Real-time PCR方法定量检测子宫基质细胞蜕膜化的变化趋势。结果表明：在子宫腺上皮Ishikawa细胞系中，CdCl2处理24h后SGK1的表达量有下调变化；CdCl2处理48h后SGK1和整合素β3的表达量下调。此外，无论CdCl2处理时间长短，孕酮受体（PR）的表达量都有所降低。在子宫腔上皮中，CdCl2处理24h和48h都引起P-STAT3表达量的上调和OPN表达量的下调，而且CdCl2处理48h还引起ER表达量的下调。CdCl2可以显著促进子宫基质4003细胞蜕膜化标志分子IGFBP1的表达。延迟与激活胚胎着床小鼠模型建立成功，腹腔注射2.5mg/kg CdCl2组小鼠死亡，而腹腔注射0.5mg/kg剂量组小鼠子宫腔中发现有存活胚胎，但是未能激活胚胎的着床。

目录

声明

中英文缩略词表

1 引言

1. 1 胚胎着床

1. 2胚胎着床相关分子

1. 3 蜕膜化

1. 4 重金属镉

1. 5 研究目的

2 材料与方法

2. 1 实验地点和时间

2. 2 实验试剂

2. 3 实验动物

2. 4 细胞培养

2. 5 细胞处理

2.6 PCR引物设计

2. 7实验材料的收集与实验步骤

2. 8统计学分析

2.9Western blot

3. 1子宫上皮细胞活性

3.2 CdCl2对子宫上皮接受性的影响

3. 3 延迟与激活胚胎着床模型

3.4 CdCl2对蜕膜化的影响

4 讨论

4. 1 对子宫上皮接受态与着床影响

4. 2 诱导蜕膜化

5总结

致谢

参考文献