大豆孢囊线虫及南方根结线虫无菌培养的研究

摘要

本论文以10%NaClO和升汞消毒剂为材料，在无菌条件下探究大豆，小麦，空心菜，番茄种子的消毒方法，以获得无菌的大豆，小麦，空心菜，番茄离体根尖。同时在无菌条件下摸索大豆孢囊线虫（Heterodera Glycines），小麦菲利普孢囊线虫（Heterodera filipjevi），南方根结线虫（Meloidogyne incongnita）的消毒方法，通过接种无菌的卵粒或二龄幼虫来完成大豆孢囊线虫，小麦菲利普孢囊线虫以及南方根结线虫的无菌培养。结果如下：
　　大豆种子消毒的最佳处理为：种子于清水中冲洗30min，无菌条件下，5%NaC lO消毒种子20min，灭菌水冲洗种子后剥去种皮并置于1%水琼脂培养基培养。种子的污染率为11.11%，发芽率为83.33%。无菌条件下将2～3cm长的大豆离体根尖分别转移至B-5和MS培养基上培养，大豆离体根尖在B-5培养基上的培养情况较好，侧根较为浓密且不会出现褐化现象。
　　无菌条件下探究了4种大豆孢囊线虫的消毒方法。综合多方面因素可得最佳处理为方法三：1%NaClO消毒孢囊12min，孢囊在MS培养基上的污染率为5.23%。接种28个无菌的大豆孢囊，每皿接种1-3个于大豆根尖处，26℃黑暗培养34天，23皿中2皿共长出2个大豆孢囊。其次为方法二：3%NaClO消毒大豆孢囊4min，无菌水冲洗后，镊子捣碎孢囊并弃去孢囊皮，接着用1%NaC lO消毒卵粒4min，卵粒在MS培养基上的污染率为24%。接种无菌卵粒至20皿大豆根尖处，26℃黑暗培养25天后，其中3皿共长出11个大豆孢囊。以及方法四：0.5%NaC lO消毒大豆孢囊10min，无菌条件下孵化，再以0.5%NaC lO消毒二龄幼虫4min，二龄幼虫在MS培养基上的污染率为17%。接种二龄幼虫至20皿大豆离体根尖处，每皿接种10条左右，26℃黑暗培养20天后，其中1皿长出4个大豆孢囊，10天左右孢囊开始褐化，转移褐色孢囊至新的大豆离体根尖处。28天后，3皿共扩繁出4个大豆孢囊。
　　小麦种子消毒的最佳处理为：无菌条件下1%NaClO消毒小麦种子20min，灭菌水冲洗，3%多菌灵（75%可湿性粉剂）浸泡20min，污染率最低为3%，发芽率为40%。
　　无菌条件下转移2～3cm长的小麦根尖（农大211）至MS+0.5mg/L IBA培养基上的培养情况最佳，表现为主根较长，侧根较浓密。其次为转移小麦根尖（农大211）至MS培养基。再其次为转移根尖（矮抗58）至MS培养基。
　　番茄种子和空心菜种子消毒方面，无菌条件下分别用5%NaClO消毒种子20min后，番茄种子的污染率为0%，发芽率为96%；空心菜种子的污染率为0%，发芽率为94%。空心菜离体根尖在MS培养基的培养情况优于番茄离体根尖。
　　无菌条件下用1%NaClO消毒3个南方根结线虫的卵囊4min，接种卵粒至空心菜离体根尖周围，26℃黑暗培养11天后在空心菜根系上长出根结，50～60天繁殖出大量二龄幼虫，污染率为23%。

目录

声明

1 前言

1. 1 大豆孢囊线虫，小麦菲利普孢囊线虫及南方根结线虫的危害

1. 2 孢囊线虫及根结线虫的防治方法

1. 3 孢囊线虫及根结线虫的生物学特性

1. 4 线虫的人工培养方法

1. 5 国内外大豆孢囊线虫，小麦菲利普孢囊线虫以及根结线虫无菌培养的研究现状

1. 6 研究内容及意义

2 材料与方法

2. 1 材料

2.1.1 供试植物材料

2.1.2 供试植物线虫

2.1.3 主要试剂

2.1.4 主要仪器设备

2.1.5 其他材料

2.1.6 实验中所需溶液的配制

2. 2 方法

2.2.1 大豆孢囊线虫的无菌培养

2.2.2 小麦离体根尖的无菌培养

2.2.3 南方根结线虫的无菌培养

2.2.4 数据统计分析方法

3 结果与分析

3. 1 大豆孢囊线虫的无菌培养

3.1.1 大豆种子发芽率的测试

3.1.2 大豆种子的消毒

3.1.3 消毒孢囊，卵粒，二龄幼虫

3. 2 小麦离体根尖的无菌培养

3.2.1 小麦种子发芽率的测试

3.2.2 小麦种子的消毒

3.2.3 获得无菌的小麦离体根尖

3. 3 南方根结线虫的无菌培养

3.3.1 番茄种子和空心菜种子发芽率的测试

3.3.2 番茄和空心菜种子的消毒

3.3.3 番茄和空心菜离体根尖的培养情况

3.3.4 接种南方根结线虫卵粒的结果

4 结论与讨论

4.1结论

4.1.1 大豆孢囊线虫的无菌培养

4.1.2 小麦种子的消毒及离体根尖的培养

4.1.3 南方根结线虫的无菌培养

4. 2 讨论

4.2.1 大豆种子的消毒

4.2.2 小麦种子的消毒

4.2.3 杀菌剂在组织培养中的应用

4.2.4 植物组织培养中常见的污染分析

4.2.5 大豆离体根尖与小麦离体根尖培养情况的比较

4.2.6 大豆孢囊线虫四种消毒方法的比较

4.2.7 南方根结线虫的无菌培养

4.2.8 大豆孢囊线虫与南方根结线虫无菌培养的比较

4.2.9 本论文的创新之处

致谢

参考文献