应用酵母双杂交系统筛选hALR的相互作用蛋白

摘要

该研究应用酵母双杂交系统从人肝组织cDNA文库中筛选与人肝再生增强因子(hALR)的相互作用蛋白.主要方法如下:一、抽提胎儿肝组织的mRNA,逆转录聚合链式反应(RT-PCR)扩增到hALR基因读码框片断,将其定向重组入DNA-BD载体pGBKT7,并用限制性内切酶酶切和DNA测序分析来鉴定构建的

目录

文摘

英文文摘

华南理工大学学位论文原创性声明及版权使用授权书

第一章绪论

1.1肝再生的研究现状

1.2肝再生增强因子的研究进展

1.2.1 ALR的基因结构和蛋白质结构

1.2.2 ALR的体内表达分布

1.2.3 ALR的生物学功能

1.2.4 ALR的研究现状

1.3酵母双杂交系统的基本原理

1.4本课题的意义、思路、技术路线

第二章诱饵质粒pGBKT7-hALR的构建与鉴定

2.1引言

2.2实验材料

2.2.1菌种

2.2.2质粒

2.2.3试剂盒

2.2.4培养基

2.2.5主要试剂

2.2.6主要仪器与设备

2.3实验方法

2.3.1 RT-PCR法扩增目的基因

2.3.2 pGBKT7-hALR重组质粒的构建

2.3.3大肠杆菌的转化

2.3.4酵母转化—醋酸锂(LiAc)转化法

2.3.5 β-半乳糖苷酶活性滤膜影印分析法

2.3.6抽提酵母蛋白提取物

2.3.7 Western blot检测hALR蛋白的表达

2.4结果与讨论

2.4.1 hALR cDNA的RT-PCR结果

2.4.2重组质粒pGBKT7-hALR的鉴定

2.4.3 pGBKT7-hALR转入AH109

2.4.4 β-半乳糖苷酶活性分析结果

2.4.5表达产物的鉴定

2.5小结

第三章AD文库的筛选

3.1引言

3.2实验材料

3.2.1主要材料与试剂

3.2.2主要仪器与设备

3.3实验方法

3.3.1文库滴度

3.3.2酵母接合

3.3.3抽提酵母总DNA

3.3.4酵母总DNA转化E.coli

3.3.5质粒DNA的快速抽提

3.3.6阳性候选克隆的鉴定与归类

3.3.7回转实验

3.3.8 DNA序列分析

3.4结果与讨论

3.4.1文库的滴度及与AH109(pGBKT7-hALR)的接合效率

3.4.2文库的初步筛选

3.4.3阳性候选克隆的鉴定与归类

3.4.4回转实验

3.4.5测序结果及分析

3.5小结

结论与展望

参考文献

攻读学位期间发表的论文

致谢